在siRNA转染实验中，总是能看到正向转染和反向转染，那么到底什么是正向转染，什么是反向转染呢？两者的区别是什么？

• 反向转染操作流程中，siRNA先加入到培养板中，然后加入转染试剂，复合物形成后再加入细胞。

• 正向转染相反，正向转染是先将细胞加入培养板然后再加转染复合物。

也就是说，把细胞加到复合物中，那么就是反向转染；把复合物加到细胞中就是正向转染。

反向转染已被广泛使用，尤其在高通量实验中，因为反向转染可以简单地被自动化，且siRNA可被储存在培养板中，无需使用另外的板形成siRNA-转染试剂复合物，这样也节省了试剂。

反向转染又称为reverse transfection 或者neofection，和传统转染方法相比区别在于，传统方法需要提前一天接种铺板，培养24时后等细胞到一定汇合度再加转染复合物转染；而反向转染则是不用预先接种细胞，先加入转染试剂和siRNA混合物在培养板上共同温育，然后再加入细胞铺板，培养。这个方法的好处不单是可以节约一整天的时间，而且转染效率高。原因可能是由于细胞尚未贴壁时接触转染试剂siRNA 复合物的表面积更大，使得转染效率更高。大量的细胞株实验表明，其他条件相同的情况下反向转染得到的RNA 干扰效果比传统转染方法更好，连一些难以转染的细胞株如HepG2细胞也能得到非常好的RNAi 结果。在反向转染实验中，细胞的密度不再困扰实验人员，有实验表明，收获细胞时细胞密度对RNAi 结果没有明显的影响，而胰酶处理收获细胞后，让悬浮的细胞和转染复合物混合后再铺板培养，既比传统方法节约了一天培养时间，也不用考虑细胞密度这个问题。

反向转染的概念适合高通量转染的需求，使得转染不再停留在手工操作上。在实际的高通量操作，为方便操作，流程也可改为先加稀释的siRNA，再加稀释的转染试剂，温育一定时间后加细胞。

Qiagen "Fast Foward"转染的方法，即在传统方法接种铺板后，无需等待一天，立即配置转染复合物，然后加入转染复合物温育。不过生物通小编个人觉得这2种方法差别无非是先加细胞还是先加转染复合物的问题，并且，先加转染试剂再加细胞，还可以减少温度反复变化对细胞生长的影响，我个人觉得更优一些。

Souce: 纽普生物    2017-05-17