pSGHV0 载体 (V003260)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pSGHV0
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
4614 bp
载体类型:
Cloning vector
复制子:
ori
载体来源:
Leahy DJ, Dann CE III, Longo P, Perman B, Ramyar KX.
启动子:
SRα

pSGHV0 载体图谱

pSGHV04614 bp600120018002400300036004200SR-alpha promoterRegion: human growth hormone precursorRegion: octahistidine tag8xHismultiple cloning siteSV40 poly(A) signaloriAmpRAmpR promoter

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pSGHV0 载体序列

LOCUS       40924_39937        4614 bp DNA     circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION  Cloning vector pSGHV0, complete sequence.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4614)
  AUTHORS   Leahy DJ, Dann CE III, Longo P, Perman B, Ramyar KX.
  TITLE     A mammalian expression vector for expression and purification of 
            secreted proteins for structural studies
  JOURNAL   Protein Expr. Purif. 20 (3), 500-506 (2000)
  PUBMED    11087690
REFERENCE   2  (bases 1 to 4614)
  AUTHORS   Leahy DJ.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (06-JUL-2000) Biophysics, Johns Hopkins University, 725 N.
            Wolfe St., Baltimore, MD 21205, USA
REFERENCE   3  (bases 1 to 4614)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 4614)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Protein 
            Expr. Purif."; date: "2000"; volume: "20"; issue: "3"; pages: 
            "500-506"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (06-JUL-2000) Biophysics, Johns Hopkins University, 725 N. Wolfe 
            St., Baltimore, MD 21205, USA"
COMMENT     SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4614
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        18..631
                     /label=SR-alpha promoter
                     /note="hybrid promoter consisting of the SV40 early
                     promoter plus part of the long terminal repeat of human 
                     T-lymphotrophic virus 1"
     misc_feature    join(700..709,970..1130,1340..1459,1552..1716,1969..2139)
                     /label=Region: human growth hormone precursor
                     /note="Region: human growth hormone precursor"
     sig_peptide     join(700..709,970..1037)
     misc_feature    2140..2163
                     /label=Region: octahistidine tag
                     /note="Region: octahistidine tag"
     CDS             2170..2193
                     /label=8xHis
                     /note="8xHis affinity tag"
     CDS             2215..2235
                     /label=TEV site
                     /note="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and 
                     cleavage site"
     misc_feature    2233..2284
                     /label=multiple cloning site
                     /note="multiple cloning site"
     polyA_signal    complement(2286..2420)
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(2747..3335)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(3509..4366)
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(4367..4471)
                     /label=AmpR promoter