病毒的血清学实验-病毒红细胞凝集试验

有些病毒(如流感病毒等)表面有血凝素(为糖蛋白)在一定条件下,能与鸡,豚鼠的红细胞表面的糖蛋白受体结合而发生凝集现象。利用病毒血凝试验可以检测某些病毒的存在,滴定病毒的血凝效价,便可大致估计病毒颗粒的数量(1 个血凝单位=106病毒颗粒)。若血清中出现特异性抗体与相应病毒结合后,使病毒失去凝集红细胞的能力,从而抑制血凝现象的出现,此为血凝抑制现象。

1.  取一块洗净晾干的20 孔凹窝塑料板,用蜡笔做好标记。用带有橡皮吸头的吸管,于1~6 孔内各加人生理盐水0.2 ml,在第1孔内加入已经稀释成1:5 的流感病毒尿囊液0.2 m1,混匀后吸出0.2 ml 至第2 孔,再混匀后吸0.2 ml 至第3 孔,如此稀释到第8孔(病毒稀释度即分别为1:10~1280),自第8 孔吸出0.2 ml 弃去(弃于消毒缸中),第9 孔不加流感病毒尿囊液,作红细胞对照。

2.  每孔加人1% 鸡红细胞0.2 m1,摇匀后置室温45 分钟。

3.  观察结果时,直接观察塑科板孔内的红细胞凝集式样,判断结果并作记录。

最高病毒稀释度呈"++" 凝集者作为病毒的红细胞凝集滴度,亦即1 个血凝单位。例如1:320 为"++",即为1 个血凝单位,在红细胞凝集抑制试验中,病毒血凝素需用4个单位,按上例1 个血凝单位为1:320,则1:80含病毒的尿囊液即为4 个血凝单位。

注意事项
1.  用反复吹吸法稀释混匀病毒或血清时,手法要轻,稳,尽量减少气泡出现;

2.  为了实验准确,加红细胞时,应从最后一孔起向前加;

3.  加样毕,可将塑料板放光滑台面上慢慢划圈摇匀,但要防止溅出;

观察结果时,塑料板底部垫上白纸,减少移动并按时观察,若延续时间太长,则可能出现病毒凝集红细胞后再解离的现象,从而影响结果观察。

2014-12-12