肿瘤细胞诱导血管生成模型实验

无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。

一、实验步骤

1.  用DEM培养液洗涤对数生长期的肿瘤细胞,收集并重新悬浮细胞于DEM培养液中。

2.  悬浮的肿瘤细胞与1.2%藻酸钠溶液混合,稀释后的藻酸钠浓度为0.8%,细胞浓度为(1~5)×10 6 细胞/ml。

3.  把0.8%藻酸钠的肿瘤细胞稀释液装入喷雾器内,用力使液体压出喷嘴。

4.  当水溶性的藻酸钠与80 mmol/l CaCl 2 混合,Na + 被Ca 2+ 取代后变成胶。

5.  空气压力和喷出的速度决定藻酸钠胶粒的大小,可用培养液或0.15 mol/ NaCl漂洗胶粒。

6.  加入0.5 ml含有1%EDTA的0.9%NaCl溶液至0.5 ml 藻酸钠包埋的细胞中。

7.  EDTA能破坏Ca 2+ 与藻酸的结合键,使胶转变成液体。

8.  台盼蓝测定肿瘤细胞。

9.  用50%的藻酸钠溶液稀释包埋细胞,以便在恒定体积内得到所需的肿瘤细胞数。

10.  用21号针沿腹白线皮下注射200 ul 藻酸钠溶液包埋的肿瘤细胞,以藻酸钠溶液作为对照。

11.  3~21天后,处死动物,从腹部皮下分离出藻酸盐胶粒:

(1)10%中性甲醛固定,石蜡包埋,切片,染色,进行组织化学和免疫化学检查。

(2)诸葛将其称重,于室温下载水中浸泡、摇动过夜,采用Drabkin’s分析方法在分光光度计540 nm 测定上清液中的血红蛋白含量。

(3)在处死动物前1 h,把 51 Cr标记的红细胞从尾静脉注射至小鼠体内。

(4)拉颈处死小鼠后,将分离出的藻酸钠胶粒和远离胶粒的一块组织称重,并用γ计数仪测定放射性。

2014-12-12