一、实验步骤
1. 用DEM培养液洗涤对数生长期的肿瘤细胞,收集并重新悬浮细胞于DEM培养液中。
2. 悬浮的肿瘤细胞与1.2%藻酸钠溶液混合,稀释后的藻酸钠浓度为0.8%,细胞浓度为(1~5)×10 6 细胞/ml。
3. 把0.8%藻酸钠的肿瘤细胞稀释液装入喷雾器内,用力使液体压出喷嘴。
4. 当水溶性的藻酸钠与80 mmol/l CaCl 2 混合,Na + 被Ca 2+ 取代后变成胶。
5. 空气压力和喷出的速度决定藻酸钠胶粒的大小,可用培养液或0.15 mol/ NaCl漂洗胶粒。
6. 加入0.5 ml含有1%EDTA的0.9%NaCl溶液至0.5 ml 藻酸钠包埋的细胞中。
7. EDTA能破坏Ca 2+ 与藻酸的结合键,使胶转变成液体。
8. 台盼蓝测定肿瘤细胞。
9. 用50%的藻酸钠溶液稀释包埋细胞,以便在恒定体积内得到所需的肿瘤细胞数。
10. 用21号针沿腹白线皮下注射200 ul 藻酸钠溶液包埋的肿瘤细胞,以藻酸钠溶液作为对照。
11. 3~21天后,处死动物,从腹部皮下分离出藻酸盐胶粒:
(1)10%中性甲醛固定,石蜡包埋,切片,染色,进行组织化学和免疫化学检查。
(2)诸葛将其称重,于室温下载水中浸泡、摇动过夜,采用Drabkin’s分析方法在分光光度计540 nm 测定上清液中的血红蛋白含量。
(3)在处死动物前1 h,把 51 Cr标记的红细胞从尾静脉注射至小鼠体内。
(4)拉颈处死小鼠后,将分离出的藻酸钠胶粒和远离胶粒的一块组织称重,并用γ计数仪测定放射性。