我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
The pYES2 vector is an episomal high-copy plasmid designed for galactose-inducible protein expression in Saccharomyces cerevisiae.
- 载体名称:
- pYES2
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5860 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Invitrogen (Life Technologies)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- GAL1
- 感受态:
- stbl3
- 培养温度:
- 37℃
pYES2 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pYES2 载体序列
LOCUS Exported 5860 bp DNA circular SYN 02-SEP-2024 DEFINITION High-copy episomal vector for galactose-inducible expression of proteins in Saccharomyces cerevisiae. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS pYES2 SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 5860) AUTHORS Invitrogen (Life Technologies) TITLE Direct Submission REFERENCE 2 (bases 1 to 5860) TITLE Direct Submission REFERENCE 3 (bases 1 to 5860) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article" COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..5860 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" source 1..5858 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" promoter 2..443 /label=GAL1 promoter /note="inducible promoter, regulated by Gal4" promoter 475..493 /label=T7 promoter /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase" misc_feature 501..600 /label=MCS /note="MCS" /note="multiple cloning site" terminator 609..856 /label=CYC1 terminator /note="transcription terminator for CYC1" rep_origin complement(1104..1692) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" CDS complement(1866..2723) /codon_start=1 /label=AmpR /note="beta-lactamase" /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS LIKHW" CDS complement(2822..3622) /label=URA3 /note="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required for uracil biosynthesis" promoter complement(3623..3838) /label=URA3 promoter rep_origin complement(4439..5316) /direction=LEFT /label=2u ori /note="yeast 2u plasmid origin of replication" rep_origin complement(5327..5840) /direction=LEFT /label=M13 ori /note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow indicates direction of (+) strand synthesis"