我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
The pPICZα A is a Pichia pastoris vector for methanol-inducible expression of a secreted protein.
- 载体名称:
- pPICZα A
- 载体抗性:
- Bleomycin
- 载体长度:
- 3616 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Invitrogen (Life Technologies)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- AOX1
- 感受态:
- stbl3
- 培养温度:
- 37℃
pPICZα A 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pPICZα A 载体序列
LOCUS Exported 3616 bp DNA circular SYN 13-DEC-2024 DEFINITION synthetic circular DNA ACCESSION . VERSION . KEYWORDS pPICZ-alpha A SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 3616) AUTHORS 11111111 TITLE Direct Submission FEATURES Location/Qualifiers source 1..3616 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" promoter 2..940 /gene="Pichia pastoris AOX1" /label=AOX1 promoter /note="inducible promoter, regulated by methanol" CDS 941..1207 /codon_start=1 /gene="MF-alpha-1" /product="N-terminal secretion signal from S. cerevisiae alpha-factor" /label=alpha-factor secretion signal /note="Cleavage by the Kex2 protease occurs after the dibasic KR sequence. The EA dipeptides are then removed by dipeptidyl aminopeptidase A." /translation="MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLE GDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEA" CDS 1275..1304 /codon_start=1 /product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag" /label=Myc /translation="EQKLISEEDL" CDS 1320..1337 /codon_start=1 /product="6xHis affinity tag" /label=6xHis /translation="HHHHHH" terminator 1417..1663 /gene="Pichia pastoris AOX1" /label=AOX1 terminator /note="transcription terminator for AOX1" promoter 2120..2167 /label=EM7 promoter /note="synthetic bacterial promoter " CDS 2186..2560 /codon_start=1 /gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus" /product="antibiotic-binding protein" /label=BleoR /note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and Zeocin(TM)" /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR EFALRDPAGNCVHFVAEEQD" terminator 2626..2873 /gene="S. cerevisiae CYC1" /label=CYC1 terminator /note="transcription terminator for CYC1" rep_origin complement(2948..3536) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication"