我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
The pPICZα A is a Pichia pastoris vector for methanol-inducible expression of a secreted protein.
- 载体名称:
- pPICZα A
- 载体抗性:
- Bleomycin
- 载体长度:
- 3616 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Invitrogen (Life Technologies)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- AOX1
- 感受态:
- stbl3
- 培养温度:
- 37℃
pPICZα A 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pPICZα A 载体序列
LOCUS Exported 3616 bp DNA circular SYN 13-DEC-2024
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pPICZ-alpha A
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3616)
AUTHORS 11111111
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3616
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 2..940
/gene="Pichia pastoris AOX1"
/label=AOX1 promoter
/note="inducible promoter, regulated by methanol"
CDS 941..1207
/codon_start=1
/gene="MF-alpha-1"
/product="N-terminal secretion signal from S. cerevisiae
alpha-factor"
/label=alpha-factor secretion signal
/note="Cleavage by the Kex2 protease occurs after the
dibasic KR sequence. The EA dipeptides are then removed by
dipeptidyl aminopeptidase A."
/translation="MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLE
GDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEA"
CDS 1275..1304
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
/label=Myc
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 1320..1337
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
terminator 1417..1663
/gene="Pichia pastoris AOX1"
/label=AOX1 terminator
/note="transcription terminator for AOX1"
promoter 2120..2167
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
CDS 2186..2560
/codon_start=1
/gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
/product="antibiotic-binding protein"
/label=BleoR
/note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and
Zeocin(TM)"
/translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
terminator 2626..2873
/gene="S. cerevisiae CYC1"
/label=CYC1 terminator
/note="transcription terminator for CYC1"
rep_origin complement(2948..3536)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"