我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pFA6a-GFP(S65T)-TRP1
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4331 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Longtine MS, McKenzie A, Demarini DJ, Shah NG, Wach A, Brachat A,
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- TRP1
pFA6a-GFP(S65T)-TRP1 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pFA6a-GFP(S65T)-TRP1 载体序列
LOCUS 40924_19276 4331 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Plasmid with a TRP1 marker for adding a C-terminal GFP tag or
truncating a gene.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4331)
AUTHORS Longtine MS, McKenzie A, Demarini DJ, Shah NG, Wach A, Brachat A,
Philippsen P, Pringle JR.
TITLE Additional modules for versatile and economical PCR-based gene
deletion and modification in Saccharomyces cerevisiae.
JOURNAL Yeast 1998;14:953-61.
PUBMED 9717241
REFERENCE 2 (bases 1 to 4331)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 4331)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Yeast";
date: "1998"; volume: "14"; pages: "953-61"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4331
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
CDS 63..773
/codon_start=1
/label=GFP (S65T)
/note="S65T variant of Aequorea victoria green fluorescent
protein (Heim et al., 1995)"
/translation="SKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKF
ICTTGKLPVPWPTLVTTFTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGN
YKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVN
FKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEF
VTAAGITHGMDELYK"
terminator 797..984
/label=ADH1 terminator
/note="transcription terminator for the S. cerevisiae
alcohol dehydrogenase 1 (ADH1) gene"
promoter 992..1139
/label=TRP1 promoter
CDS 1140..1811
/codon_start=1
/label=TRP1
/note="phosphoribosylanthranilate isomerase, required for
tryptophan biosynthesis"
/translation="MSVINFTGSSGPLVKVCGLQSTEAAECALDSDADLLGIICVPNRK
RTIDPVIARKISSLVKAYKNSSGTPKYLVGVFRNQPKEDVLALVNDYGIDIVQLHGDES
WQEYQEFLGLPVIKRLVFPKDCNILLSAASQKPHSFIPLFDSEAGGTGELLDWNSISDW
VGRQESPESLHFMLAGGLTPENVGDALRLNGVIGVDVSGGVETNGVKDSNKIANFVKNA
KK"
promoter complement(1969..1987)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
rep_origin complement(2245..2833)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3007..3864)
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3865..3969)
/label=AmpR promoter
promoter 4315..4331
/label=SP6 promoter
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"