我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pGFP-V-RS
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 7586 bp
- 载体类型:
- Viral Expression & Packaging Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- OriGene
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- CMV
pGFP-V-RS 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGFP-V-RS 载体序列
LOCUS pGFP-V-RS. 7586 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION HuSH-29 retroviral vector with kanamycin and puromycin resistance
markers and a TurboGFP gene, for expressing an shRNA from the U6
promoter.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pGFP-V-RS
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7586)
AUTHORS OriGene
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 7586)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT The shRNA cassette consists of a 29-bp gene-specific sequence,
followed by a 7-bp loop, followed by the reverse complement of the
29-bp sequence, followed by a TTTTTT terminator.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7586
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 90..330
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_feature 334..385
/label=shRNA site
/note="shRNA site"
/note="shRNA insertion site"
promoter 441..651
/label=SV40 promoter
/note="SV40 early promoter"
CDS 673..1269
/label=PuroR
/note="puromycin N-acetyltransferase"
LTR 1351..1944
/label=LTR
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
rep_origin complement(2316..2904)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
polyA_signal complement(3091..3567)
/label=hGH poly(A) signal
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
primer_bind 3578..3594
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS complement(3688..4383)
/label=TurboGFP
/note="improved green fluorescent protein from Pontellina
plumata (Evdokimov et al., 2006)"
promoter complement(4427..4445)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter complement(4471..4674)
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer complement(4675..5054)
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
CDS complement(5292..6098)
/label=KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
LTR 6232..6701
/label=LTR
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 6766..6965
/label=MMLV Psi
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 7158..7574
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"