pQE-16 载体 (V010803)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pQE-16
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
3996 bp
载体类型:
Qiagen Vectors
复制子:
ori
载体来源:
Qiagen
拷贝数:
High copy number
启动子:
T5

pQE-16 载体图谱

pQE-163996 bp60012001800240030003600T5 promoterlac operatorRBSATGDHFR6xHisstop codonslambda t0 terminatorCmRrrnB T1 terminatorbomoriAmpRAmpR promoter

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pQE-16 载体序列

LOCUS       pQE-16.        3996 bp DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Bacterial vector for expressing DHFR fusion proteins with a 
            C-terminal 6xHis tag. Similar to pQE-19 and pQE-22, but with a 
            different reading frame after the DHFR.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pQE-16
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3996)
  AUTHORS   Qiagen
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 3996)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3996
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        10..54
                     /label=T5 promoter
                     /note="bacteriophage T5 promoter for E. coli RNA
                     polymerase, with embedded lac operator"
     protein_bind    62..78
                     /label=lac repressor encoded by lacI binding site
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     RBS             101..106
                     /note="ribosome binding site"
     CDS             115..117
                     /codon_start=1
                     /product="start codon"
                     /label=start codon
                     /note="ATG"
                     /translation="M"
     CDS             133..690
                     /label=DHFR
                     /note="mouse dihydrofolate reductase"
     CDS             703..720
                     /label=6xHis
                     /note="6xHis affinity tag"
     misc_feature    727..737
                     /label=stop codons
                     /note="stop codons"
                     /note="stop codons in all three reading frames"
     terminator      743..837
                     /label=lambda t0 terminator
                     /note="transcription terminator from phage lambda"
     CDS             881..1537
                     /label=CmR
                     /note="chloramphenicol acetyltransferase"
     terminator      1605..1691
                     /label=rrnB T1 terminator
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
                     gene"
     misc_feature    1846..1986
                     /label=bom
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     rep_origin      complement(2172..2760)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2934..3791)
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(3792..3896)
                     /label=AmpR promoter