我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pGEX-5X-1
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4972 bp
- 载体类型:
- pGEX Vectors (GE Healthcare)
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- GE Healthcare
- 拷贝数:
- High copy number
pGEX-5X-1 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGEX-5X-1 载体序列
LOCUS pGEX-5X-1. 4972 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980 DEFINITION Bacterial vector for expressing GST fusion proteins with a Factor Xa site. For other reading frames, use pGEX-5X-2 or pGEX-5X-3. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS pGEX-5X-1 SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 4972) AUTHORS GE Healthcare TITLE Direct Submission REFERENCE 2 (bases 1 to 4972) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..4972 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" promoter 183..211 /label=tac promoter /note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and lac UV5 promoters" protein_bind 219..235 /label=lac operator /note="The lac repressor binds to the lac operator to inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be relieved by adding lactose or isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)." CDS 258..911 /label=GST /note="glutathione S-transferase from Schistosoma japonicum" CDS 921..932 /label=Factor Xa site /note="Factor Xa recognition and cleavage site" misc_feature 934..969 /label=MCS /note="MCS" /note="multiple cloning site" misc_feature 974..984 /label=stop codons /note="stop codons" /note="stop codons in all three reading frames" promoter 1275..1379 /label=AmpR promoter CDS 1380..2237 /label=AmpR /note="beta-lactamase" rep_origin 2411..2999 /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" promoter 3243..3320 /label=lacIq promoter /note="In the lacIq allele, a single base change in the promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold." CDS 3321..4400 /label=lacI /note="lac repressor" protein_bind 4416..4437 /label=CAP binding site /note="CAP binding activates transcription in the presence of cAMP." promoter 4452..4482 /label=lac promoter /note="promoter for the E. coli lac operon" CDS 4526..4699 /label=lacZ-alpha /note="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"