我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pGL3-Promoter
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5010 bp
- 载体类型:
- Luciferase Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Promega
- 拷贝数:
- High copy number
pGL3-Promoter 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGL3-Promoter 载体序列
LOCUS 40924_21978 5010 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018 DEFINITION Cloning vector pGL3-Promoter, complete sequence. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 5010) AUTHORS Groskreutz DJ, Schenborn ET. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (26-JAN-1996) D.J. Groskreutz, R REFERENCE 2 (bases 1 to 5010) AUTHORS Kenefick K. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (05-MAR-2001) Technical Writing, Promega Corporation, 2800 Woods Hollow Road, Madison, WI 53711-5399, USA REFERENCE 3 (bases 1 to 5010) TITLE Direct Submission REFERENCE 4 (bases 1 to 5010) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted (26-JAN-1996) D.J. Groskreutz, R" COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted (05-MAR-2001) Technical Writing, Promega Corporation, 2800 Woods Hollow Road, Madison, WI 53711-5399, USA" COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article" COMMENT On Mar 5, 2001 this sequence version replaced U47298.1. FEATURES Location/Qualifiers source 1..5010 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" misc_feature 1..41 /label=multiple cloning site /note="multiple cloning site" promoter 48..244 /label=SV40 promoter /note="SV40 early promoter" CDS 280..1929 /codon_start=1 /label=luciferase /note="firefly luciferase" /translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV" polyA_signal complement(1973..2094) /label=SV40 poly(A) signal /note="SV40 polyadenylation signal" primer_bind complement(2253..2272) /label=RV primer4 sequencing primer binding site /note="RV primer4 sequencing primer binding site" rep_origin 2510 /label=ColE1-derived plasmid replication origin /note="ColE1-derived plasmid replication origin" rep_origin complement(2513..3101) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" CDS complement(3275..4132) /codon_start=1 /label=AmpR /note="beta-lactamase" /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS LIKHW" promoter complement(4133..4237) /label=AmpR promoter rep_origin 4264..4719 /direction=RIGHT /label=f1 ori /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow indicates direction of (+) strand synthesis" polyA_signal 4850..4898 /label=poly(A) signal /note="synthetic polyadenylation signal" misc_feature 4912..5003 /label=pause site /note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from the human alpha-2 globin gene"