首页技术支持质粒载体

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

Gateway destination vector for inducible high-level expression of N-terminally GST-tagged proteins in bacterial cells. BL21-AI expresses T7 polymerase induced by arabinose and recognizes the T7 promoter, so expression of the protein must be induced by adding arabinose to the medium.

载体名称:
pDEST15
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
7012 bp
载体类型:
Gateway Cloning Vectors
复制子:
ori
载体来源:
Invitrogen (Life Technologies)
拷贝数:
High copy number
启动子:
T7
感受态:
DB3.1

pDEST15 载体图谱

pDEST157012 bp30060090012001500180021002400270030003300360039004200450048005100540057006000630066006900T7 promoterRBSGSTattR1lac UV5 promoterCmRccdBattR2T7 terminatortet promoterAmpR promoterAmpRoribomrop

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pDEST15 载体序列

LOCUS       40924_14330        7012 bp DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Gateway(R) destination vector for inducible high-level expression of
            N-terminally GST-tagged proteins in bacterial cells.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7012)
  AUTHORS   Invitrogen (Life Technologies)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 7012)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7012
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        25..43
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     RBS             75..97
                     /label=RBS
                     /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
                     T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
     CDS             105..758
                     /codon_start=1
                     /label=GST
                     /note="glutathione S-transferase from Schistosoma
                     japonicum"
                     /translation="MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKK
                     FELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY
                     GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVL
                     YMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK"
     protein_bind    792..916
                     /label=attR1
                     /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
     promoter        941..971
                     /label=lac UV5 promoter
                     /note="E. coli lac promoter with an 'up' mutation"
     CDS             1025..1702
                     /codon_start=1
                     /label=CmR
                     /note="chloramphenicol acetyltransferase"
                     /translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
                     KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
                     LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
                     DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQAGRNLE
                     DPAY"
     CDS             2025..2327
                     /codon_start=1
                     /label=ccdB
                     /note="CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase"
                     /translation="MQFKVYTYKRESRYRLFVDVQSDIIDTPGRRMVIPLASARLLSDK
                     VPRELYPVVHIGDESWRMMTTDMASVPVSVIGEEVADLSHRENDIKNAINLMFWGI"
     protein_bind    complement(2371..2495)
                     /label=attR2
                     /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
     terminator      2573..2620
                     /label=T7 terminator
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA 
                     polymerase"
     promoter        complement(2986..3014)
                     /label=tet promoter
                     /note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
                     gene"
     promoter        3127..3231
                     /label=AmpR promoter
     CDS             3232..4089
                     /codon_start=1
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      4263..4851
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     misc_feature    complement(5037..5179)
                     /label=bom
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     CDS             complement(5284..5472)
                     /codon_start=1
                     /label=rop
                     /note="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
                     number"
                     /translation="VTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
                     DELYRSCLARFGDDGENL"