我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- 3xFLAG-dCas9/pCMV-7.1
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 8848 bp
- 载体类型:
- CRISPR Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Fujita T, Fujii H.
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- SV40
3xFLAG-dCas9/pCMV-7.1 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
3xFLAG-dCas9/pCMV-7.1 载体序列
LOCUS 3xFLAG-dCas9_pCM 8848 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Plasmid for expression in mammalian cells of FLAG(R)-tagged
catalytically inactive dCas9, for engineered ChIP (enChIP)
purification of specific genomic regions.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS 3xFLAG-dCas9 pCMV-7.1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8848)
AUTHORS Fujita T, Fujii H.
TITLE Efficient isolation of specific genomic regions and identification
of associated proteins by engineered DNA-binding molecule-mediated
chromatin immunoprecipitation (enChIP) using CRISPR.
JOURNAL Biochem. Biophys. Res. Commun. 2013;439:132-6.
PUBMED 23942116
REFERENCE 2 (bases 1 to 8848)
AUTHORS Fujii Lab / Addgene #47948
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 8848)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Biochem.
Biophys. Res. Commun."; date: "2013"; volume: "439"; pages: "132-6"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8848
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
primer_bind 141..157
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
enhancer 318..697
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 698..901
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 928..930
/codon_start=1
/product="start codon"
/label=start codon
/note="ATG"
/translation="M"
CDS 931..996
/label=3xFLAG
/note="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
CDS 1000..5103
/label=dCas9
/note="catalytically dead mutant of the Cas9 endonuclease
from the Streptococcus pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
CDS 5116..5136
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 large T
antigen"
/note="SV40 NLS"
/translation="PKKKRKV"
polyA_signal 5189..5811
/label=hGH poly(A) signal
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
promoter 5840..6169
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
promoter complement(6208..6226)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind complement(6240..6256)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind complement(6264..6280)
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(6288..6318)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind complement(6333..6354)
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(6642..7230)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7404..8261)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(8262..8366)
/label=AmpR promoter
rep_origin 8393..8848
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"