pMB1.MjYRS 载体 (V004822)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pMB1.MjYRS
载体抗性:
Streptomycin
载体长度:
5655 bp
载体类型:
Cloning vector
复制子:
p15A ori
载体来源:
Tack DS, Ellefson JW, Thyer R, Wang B, Gollihar J, Forster MT, Ellington AD.

pMB1.MjYRS 载体图谱

pMB1.MjYRS5655 bp60012001800240030003600420048005400SmRcat promoterp15A oriregulatoryTyrosine--tRNA ligaseregulatorytRNA-Tyrregulatory

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pMB1.MjYRS 载体序列

LOCUS       V004822                 5655 bp    DNA     circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V004822
VERSION     V004822
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 5655)
  AUTHORS   Tack DS, Ellefson JW, Thyer R, Wang B, Gollihar J, Forster MT,
            Ellington AD.
  TITLE     Addicting diverse bacteria to a non-canonical amino acid
  JOURNAL   Nat. Chem. Biol. (2016) In press
REFERENCE   2  (bases 1 to 5655)
  AUTHORS   Tack DS, Ellefson JW, Thyer R, Wang B, Gollihar J, Forster MT,
            Ellington AD.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (06-NOV-2015) Molecular Biosciences, University of Texas,
            2500 Speedway, Austin, TX 78660, USA
REFERENCE   3  (bases 1 to 5655)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 5655)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     ##Assembly-Data-START##
            Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing
            ##Assembly-Data-END##
            SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nat. Chem.
            Biol. (2016) In press"
            SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
            (06-NOV-2015) Molecular Biosciences, University of Texas, 2500
            Speedway, Austin, TX 78660, USA"
            SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5655
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     CDS             1440..2228
                     /label="SmR"
                     /note="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy, 1985)"
     promoter        complement(2342..2444)
                     /label="cat promoter"
                     /note="promoter of the E. coli cat gene encoding
                     chloramphenicol acetyltransferase"
     rep_origin      complement(2970..3515)
                     /direction=LEFT
                     /label="p15A ori"
                     /note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
                     origin of replication can be propagated in E. coli cells
                     that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
     regulatory      3653..3800
                     /gene="tyrS"
                     /regulatory_class="promoter"
     CDS             3814..4731
                     /gene="tyrS"
                     /label="Tyrosine--tRNA ligase"
                     /note="Tyrosine--tRNA ligase from Methanocaldococcus
                     jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM
                     10045 / NBRC 100440). Accession#: Q57834"
     regulatory      4911..4959
                     /gene="lpp"
                     /regulatory_class="promoter"
     gene            4911..4959
                     /gene="lpp"
                     /label="lpp"
     tRNA            4977..5053
                     /product="tRNA-Tyr"
                     /label="3-iodo-tyrosine non-canonical amino acid"
                     /note="3-iodo-tyrosine non-canonical amino acid"
     regulatory      5078..5107
                     /gene="rrnB"
                     /regulatory_class="terminator"
     gene            5078..5107
                     /gene="rrnB"
                     /label="rrnB"