我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pMB1.MjYRS
- 载体抗性:
- Streptomycin
- 载体长度:
- 5655 bp
- 载体类型:
- Cloning vector
- 复制子:
- p15A ori
- 载体来源:
- Tack DS, Ellefson JW, Thyer R, Wang B, Gollihar J, Forster MT, Ellington AD.
pMB1.MjYRS 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pMB1.MjYRS 载体序列
LOCUS V004822 5655 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018 DEFINITION Exported. ACCESSION V004822 VERSION V004822 KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct . REFERENCE 1 (bases 1 to 5655) AUTHORS Tack DS, Ellefson JW, Thyer R, Wang B, Gollihar J, Forster MT, Ellington AD. TITLE Addicting diverse bacteria to a non-canonical amino acid JOURNAL Nat. Chem. Biol. (2016) In press REFERENCE 2 (bases 1 to 5655) AUTHORS Tack DS, Ellefson JW, Thyer R, Wang B, Gollihar J, Forster MT, Ellington AD. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (06-NOV-2015) Molecular Biosciences, University of Texas, 2500 Speedway, Austin, TX 78660, USA REFERENCE 3 (bases 1 to 5655) TITLE Direct Submission REFERENCE 4 (bases 1 to 5655) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT ##Assembly-Data-START## Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing ##Assembly-Data-END## SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nat. Chem. Biol. (2016) In press" SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted (06-NOV-2015) Molecular Biosciences, University of Texas, 2500 Speedway, Austin, TX 78660, USA" SGRef: number: 3; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..5655 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" CDS 1440..2228 /label="SmR" /note="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy, 1985)" promoter complement(2342..2444) /label="cat promoter" /note="promoter of the E. coli cat gene encoding chloramphenicol acetyltransferase" rep_origin complement(2970..3515) /direction=LEFT /label="p15A ori" /note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A origin of replication can be propagated in E. coli cells that contain a second plasmid with the ColE1 origin." regulatory 3653..3800 /gene="tyrS" /regulatory_class="promoter" CDS 3814..4731 /gene="tyrS" /label="Tyrosine--tRNA ligase" /note="Tyrosine--tRNA ligase from Methanocaldococcus jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM 10045 / NBRC 100440). Accession#: Q57834" regulatory 4911..4959 /gene="lpp" /regulatory_class="promoter" gene 4911..4959 /gene="lpp" /label="lpp" tRNA 4977..5053 /product="tRNA-Tyr" /label="3-iodo-tyrosine non-canonical amino acid" /note="3-iodo-tyrosine non-canonical amino acid" regulatory 5078..5107 /gene="rrnB" /regulatory_class="terminator" gene 5078..5107 /gene="rrnB" /label="rrnB"