我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pMH
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 3565 bp
- 载体类型:
- Expression vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Gortchakov AA, Kaltenhauser J, Eggert H, Saumweber H.
pMH 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pMH 载体序列
LOCUS 40924_30800 3565 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018 DEFINITION Expression vector pMH, complete sequence. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 3565) AUTHORS Gortchakov AA, Kaltenhauser J, Eggert H, Saumweber H. TITLE pRich, a novel convenient Escherichia coli protein expression vector JOURNAL Unpublished REFERENCE 2 (bases 1 to 3565) AUTHORS Gortchakov AA, Kaltenhauser J, Eggert H, Saumweber H. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (27-MAR-2003) Lab. Molecular Cytogenetics, The Institute of Cytology and Genetics, SD RAS, Lavrentjeva, 10, Novosibirsk 630090, Russia REFERENCE 3 (bases 1 to 3565) TITLE Direct Submission REFERENCE 4 (bases 1 to 3565) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Unpublished" COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted (27-MAR-2003) Lab. Molecular Cytogenetics, The Institute of Cytology and Genetics, SD RAS, Lavrentjeva, 10, Novosibirsk 630090, Russia" COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..3565 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" promoter 26..44 /label=T7 promoter /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase" RBS 76..98 /label=RBS /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)" CDS 118..147 /codon_start=1 /label=Myc /note="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag" /translation="EQKLISEEDL" CDS 154..183 /codon_start=1 /product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag" /label=Myc /translation="EQKLISEEDL" CDS 190..219 /codon_start=1 /product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag" /label=Myc /translation="EQKLISEEDL" CDS 223..240 /codon_start=1 /label=6xHis /note="6xHis affinity tag" /translation="HHHHHH" misc_feature 242..257 /label=polylinker /note="polylinker" terminator 313..407 /label=lambda t0 terminator /note="transcription terminator from phage lambda" CDS 451..1107 /codon_start=1 /label=CmR /note="chloramphenicol acetyltransferase" /translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA" terminator 1175..1261 /label=rrnB T1 terminator /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB gene" misc_feature 1416..1556 /label=bom /note="basis of mobility region from pBR322" rep_origin complement(1742..2330) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" CDS complement(2504..3361) /codon_start=1 /label=AmpR /note="beta-lactamase" /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS LIKHW" promoter complement(3362..3466) /label=AmpR promoter