我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pLV-PGK-dAsCas12f1-VPR-P65-RtaAD-mCherry
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 12722 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells, Lentivirus
- 启动子:
- mPGK
- 感受态:
- Stbl3
- 培养温度:
- 37℃
pLV-PGK-dAsCas12f1-VPR-P65-RtaAD-mCherry 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pLV-PGK-dAsCas12f1-VPR-P65-RtaAD-mCherry 载体序列
LOCUS V014331 12722 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Exported.
ACCESSION V014331
VERSION V014331
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 12722)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..12722
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
misc_feature 27..144
/label="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1"
promoter 209..708
/label="PGK promoter"
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
CDS 780..800
/label="SV40 NLS"
/note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
CDS 813..2078
/gene="cas12f1"
/label="CRISPR-associated endodeoxyribonuclease Cas12f1"
/note="CRISPR-associated endodeoxyribonuclease Cas12f1 from
Sulfoacidibacillus thermotolerans. Accession#: A0A2U3D0N8"
CDS 2100..2126
/label="HA"
/note="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
CDS 2766..3137
/label="RelA (p65) AD"
/note="transcriptional activation domain of human RelA,
also known as p65 (O'Shea and Perkins, 2008)"
CDS 3156..3725
/label="Rta AD"
/note="transcriptional activation domain from the human
herpesvirus 4 (Epstein-Barr virus) replication and
transcription activator Rta/BRLF1 (Hardwick et al., 1992;
Chavez et al., 2015)"
CDS 3753..3779
/label="c-myc NLS"
/note="nuclear localization signal of human c-Myc
proto-oncogene (Dang and Lee, 1988)"
CDS 3792..4496
/label="mCherry"
/note="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
misc_feature 4563..5151
/label="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
LTR 5261..5494
/label="3' LTR (Delta-U3)"
/note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
HIV-1"
promoter complement(5519..5537)
/label="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
promoter 6325..6429
/label="AmpR promoter"
CDS 6430..7287
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
rep_origin 7461..8049
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
promoter 8295..8624
/label="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
intron 9758..9823
/label="small t intron"
/note="SV40 (simian virus 40) small t antigen intron"
CDS 9953..9973
/label="SV40 NLS"
/note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
polyA_signal 10398..10532
/label="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
LTR 10700..11333
/label="3' LTR"
/note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 11380..11505
/label="HIV-1 Psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 12002..12235
/label="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
CDS 12420..12464
/label="gp41 peptide"
/note="antigenic peptide corresponding to amino acids 655
to 669 of the HIV envelope protein gp41 (Lutje Hulsik et
al., 2013)"
CDS 12613..12654
/note="Protein Tat from Human immunodeficiency virus type 1
group M subtype B (isolate WMJ22). Accession#: P12509"
/label="Protein Tat"