pFA-myc-LUL 载体 (V016463)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pFA-myc-LUL
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
4433 bp
载体类型:
Cloning vector
复制子:
ori
载体来源:
Duenas-Santero E, Santos-Almeida A, Rojo-Dominguez P, del Rey F

pFA-myc-LUL 载体图谱

pFA-myc-LUL4433 bp600120018002400300036004200MycTranscriptional termination from Saccharomyces cerevisiae URA3 geneSK primerloxPOrotidine 5'-phosphate decarboxylaseloxPT7 promoteroriAmpRAmpR promoterSP6 promoter

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pFA-myc-LUL 载体序列

LOCUS       V016463                 4433 bp    DNA     circular SYN 17-JUL-2019
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V016463
VERSION     V016463
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 4433)
  AUTHORS   Duenas-Santero E, Santos-Almeida A, Rojo-Dominguez P, del Rey F,
            Correa-Bordes J, Vazquez de Aldana CR.
  TITLE     A new toolkit for gene tagging in Candida albicans containing
            recyclable markers
  JOURNAL   PLoS ONE (2019) In press
REFERENCE   2  (bases 1 to 4433)
  AUTHORS   Duenas-Santero E, Santos-Almeida A, Rojo-Dominguez P, del Rey F,
            Correa-Bordes J, Vazquez de Aldana CR.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (18-MAR-2019) Instituto de Biologia Funcional y Genomica
            (IBFG), Consejo Superior de Investigaciones Cientificas, Zacarias
            Gonzalez 2, Salamanca, Salamanca 37007, Spain
REFERENCE   3  (bases 1 to 4433)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     ##Assembly-Data-START##
            Assembly Method       :: Lasergene v. 13
            Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing
            ##Assembly-Data-END##
            SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "PLoS ONE
            (2019) In press"
            SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
            (18-MAR-2019) Instituto de Biologia Funcional y Genomica (IBFG),
            Consejo Superior de Investigaciones Cientificas, Zacarias Gonzalez
            2, Salamanca, Salamanca 37007, Spain"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4433
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     CDS             54..83
                     /label="Myc"
                     /note="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
     regulatory      222..477
                     /note="Transcriptional termination from Saccharomyces
                     cerevisiae URA3 gene"
                     /regulatory_class="terminator"
     primer_bind     487..503
                     /label="SK primer"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     misc_feature    517..550
                     /label="loxP"
                     /note="loxP"
     CDS             980..1789
                     /gene="URA3"
                     /label="Orotidine 5'-phosphate decarboxylase"
                     /note="Orotidine 5'-phosphate decarboxylase from Candida
                     albicans (strain SC5314 / ATCC MYA-2876). Accession#:
                     P13649"
     protein_bind    complement(1940..1973)
                     /label="loxP"
                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
                     sequence (ATGTATGC) (Shaw et al., 2021)."
     promoter        complement(2071..2089)
                     /label="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     rep_origin      complement(2347..2935)
                     /direction=LEFT
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(3109..3966)
                     /label="AmpR"
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(3967..4071)
                     /label="AmpR promoter"
     promoter        4417..4433
                     /label="SP6 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"