质粒编号
质粒名称
规格
价格
V016614
pTC223
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pTC223
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 17961 bp
- 载体类型:
- Gene knockout
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Plants
- 筛选标记:
- Neo/G418
- 启动子:
- AtU6-26
- 感受态:
- Stbl3
- 培养温度:
- 37℃
pTC223 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pTC223 载体序列
LOCUS V016614 17961 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Exported.
ACCESSION V016614
VERSION V016614
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 17961)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..17961
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
misc_feature 1..25
/label="LB T-DNA repeat"
/note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"
promoter 966..1311
/label="CaMV 35S promoter"
/note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
virus"
CDS 1345..5448
/label="Cas9"
/note="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus
pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
terminator 5492..5740
/label="HSP terminator"
/note="efficient transcription terminator from the
Arabidopsis thaliana heat shock protein 18.2 gene (Nagaya
et al., 2010)"
promoter 5785..6208
/label="AtU6-26"
/note="Arabidopsis U6-26 gene promoter"
misc_RNA 6228..6303
/label="gRNA scaffold"
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
promoter 7452..7635
/label="NOS promoter"
/note="nopaline synthase promoter"
CDS 7699..8487
/label="NeoR/KanR"
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
polyA_signal 8516..8690
/label="CaMV poly(A) signal"
/note="cauliflower mosaic virus polyadenylation signal"
promoter 8901..9246
/label="CaMV 35S promoter"
/note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
virus"
CDS complement(10435..11310)
/note="Replication-associated protein A from Bean yellow
dwarf virus. Accession#: O39521"
/label="Replication-associated protein A"
misc_feature 11684..11708
/label="RB T-DNA repeat"
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
CDS 13008..13634
/label="pVS1 StaA"
/note="stability protein from the Pseudomonas plasmid pVS1
(Heeb et al., 2000)"
CDS 14071..15135
/label="pVS1 RepA"
/note="replication protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
rep_origin 15204..15398
/label="pVS1 oriV"
/note="origin of replication for the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
misc_feature 15742..15882
/label="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(16068..16656)
/direction=LEFT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(16746..17537)
/label="KanR"
/note="aminoglycoside phosphotransferase"