我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pPpT4_MFalpha_eGFP
- 载体抗性:
- Bleomycin
- 载体长度:
- 4477 bp
- 载体类型:
- Yeast Expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Yeast
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- AOX1
- 感受态:
- DH5alpha
- 培养温度:
- 37℃
pPpT4_MFalpha_eGFP 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pPpT4_MFalpha_eGFP 载体序列
LOCUS Exported 4477 bp DNA circular SYN 29-MAY-2024 DEFINITION synthetic circular DNA. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 4477) TITLE Direct Submission REFERENCE 2 (bases 1 to 4477) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article" COMMENT Imported using the Genbank importer. File name: pPpT4_Alph_formatiert.gb FEATURES Location/Qualifiers source 1..4477 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" source 140..1070 /mol_type="other DNA" /db_xref="taxon:1182041" /organism="Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector pPpT4" source 2972..3346 /mol_type="other DNA" /db_xref="taxon:1182041" /organism="Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector pPpT4" source 3348..3823 /mol_type="other DNA" /db_xref="taxon:1182041" /organism="Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector pPpT4" misc_feature 6..131 /label=P_AOX1_Syn_dBamHI regulatory 140..1070 /label=AOX1 promoter /note="AOX1 promoter" /regulatory_class="promoter" primer_bind complement(1071..1083) /label=rv(pPpT4) CDS 1084..1350 /codon_start=1 /label=Signal sequence (MF-alpha) /translation="MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLE GDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEA" CDS 1351..2067 /codon_start=1 /label=Gene of Interest GOI (eGFP) /translation="ASKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK FICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTISFKDDG NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYITADKQKNGIKA NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE FVTAAGITHGMDELYK" primer_bind 2068..2087 /label=fw(pPpT4) terminator 2088..2334 /gene="Pichia pastoris AOX1" /label=AOX1 terminator /note="transcription terminator for AOX1" promoter 2349..2906 /label=P_ILV5 promoter 2907..2970 /label=P_EM72_Syn CDS 2972..3346 /codon_start=1 /product="zeocin resistance protein" /label=zeocin resistance protein /protein_id="AFJ20653.1" /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR EFALRDPAGNCVHFVAEEQD" regulatory 3348..3823 /label=AOD terminator /note="AOD terminator" /regulatory_class="terminator" rep_origin 3870..4458 /direction=RIGHT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication"