我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:
- 载体名称:
- pPpT4_MFalpha_eGFP
- 载体抗性:
- Bleomycin
- 载体长度:
- 4477 bp
- 载体类型:
- Yeast Expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Yeast
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- AOX1
- 感受态:
- DH5alpha
- 培养温度:
- 37℃
pPpT4_MFalpha_eGFP 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pPpT4_MFalpha_eGFP 载体序列
LOCUS Exported 4477 bp DNA circular SYN 29-MAY-2024
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4477)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 4477)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT Imported using the Genbank importer. File name:
pPpT4_Alph_formatiert.gb
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4477
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
source 140..1070
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:1182041"
/organism="Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector
pPpT4"
source 2972..3346
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:1182041"
/organism="Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector
pPpT4"
source 3348..3823
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:1182041"
/organism="Escherichia coli-Pichia pastoris shuttle vector
pPpT4"
misc_feature 6..131
/label=P_AOX1_Syn_dBamHI
regulatory 140..1070
/label=AOX1 promoter
/note="AOX1 promoter"
/regulatory_class="promoter"
primer_bind complement(1071..1083)
/label=rv(pPpT4)
CDS 1084..1350
/codon_start=1
/label=Signal sequence (MF-alpha)
/translation="MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLE
GDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEA"
CDS 1351..2067
/codon_start=1
/label=Gene of Interest GOI (eGFP)
/translation="ASKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK
FICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTISFKDDG
NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYITADKQKNGIKA
NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE
FVTAAGITHGMDELYK"
primer_bind 2068..2087
/label=fw(pPpT4)
terminator 2088..2334
/gene="Pichia pastoris AOX1"
/label=AOX1 terminator
/note="transcription terminator for AOX1"
promoter 2349..2906
/label=P_ILV5
promoter 2907..2970
/label=P_EM72_Syn
CDS 2972..3346
/codon_start=1
/product="zeocin resistance protein"
/label=zeocin resistance protein
/protein_id="AFJ20653.1"
/translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
regulatory 3348..3823
/label=AOD terminator
/note="AOD terminator"
/regulatory_class="terminator"
rep_origin 3870..4458
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"