我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
To all for PiggyBac gene insertion into Genome
- 载体名称:
- PiggyBac PlayBack
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 3237 bp
- 拷贝数:
- High copy number
- 感受态:
- Stbl3
- 培养温度:
- 37℃
PiggyBac PlayBack 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
PiggyBac PlayBack 载体序列
LOCUS Exported 3237 bp DNA circular SYN 03-DEC-2024
DEFINITION To all for PiggyBac gene insertion into Genome.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS PiggyBac PlayBack
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3237)
AUTHORS Foran G, Hallam RD, Megaly M, Turgambayeva A, Necakov A
TITLE PlayBack cloning: simple, reversible, cost-effective cloning for the
combinatorial assembly of complex expression constructs.
JOURNAL Biotechniques. 2023 Oct;75(4):168-178. doi: 10.2144/btn-2023-0042.
Epub 2023 Oct 10.
PUBMED 37815818
REFERENCE 2 (bases 1 to 3237)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; doi:
"10.2144/btn-2023-0042"; journalName: "Biotechniques"; date:
"2023-10"; volume: "75"; issue: "4"; pages: "168-178"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3237
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
primer_bind complement(29..51)
/label=pGEX 3'
/note="pGEX vectors, reverse primer"
primer_bind 151..170
/label=pRS-marker
/note="pRS vectors, use to sequence yeast selectable
marker"
repeat_region 194..228
/label=piggyBac left (5') inverted repeat
/note="piggyBac transposon-specific inverted terminal
repeat sequence (ITR)"
repeat_region 931..993
/label=piggyBac right (3') inverted repeat
/note="piggyBac transposon-specific inverted terminal
repeat sequence (ITR)"
primer_bind complement(1016..1032)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
primer_bind complement(1016..1032)
/label=M13 Reverse
/note="In lacZ gene. Also called M13-rev"
primer_bind complement(1029..1051)
/label=M13/pUC Reverse
/note="In lacZ gene"
protein_bind 1040..1056
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(1064..1094)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 1109..1130
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(1418..2006)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
primer_bind complement(1498..1517)
/label=pBR322ori-F
/note="pBR322 origin, forward primer"
CDS complement(2177..3037)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
primer_bind 2800..2819
/label=Amp-R
/note="Ampicillin resistance gene, reverse primer"
promoter complement(3038..3142)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
primer_bind 3210..3228
/label=pBRforEco
/note="pBR322 vectors, upsteam of EcoRI site, forward
primer"