首页技术支持质粒载体
质粒编号
质粒名称
规格
价格
V017511
PiggyBac PlayBack
5 μg (冻干粉)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

Note:To all for PiggyBac gene insertion into Genome

载体名称:
PiggyBac PlayBack
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
3237 bp
拷贝数:
High copy number
感受态:
DH10B
培养温度:
37℃

PiggyBac PlayBack 载体图谱

PiggyBac PlayBack3237 bp6001200180024003000pGEX 3'pRS-markerpiggyBac left (5') inverted repeatpiggyBac right (3') inverted repeatM13/pUC Reverselac promoterCAP binding siteoriAmpRAmpR promoterpBRforEco

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

PiggyBac PlayBack 载体序列

LOCUS       Exported                3237 bp DNA     circular SYN 03-DEC-2024
DEFINITION  To all for PiggyBac gene insertion into Genome.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    PiggyBac PlayBack
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3237)
  AUTHORS   Foran G, Hallam RD, Megaly M, Turgambayeva A, Necakov A
  TITLE     PlayBack cloning: simple, reversible, cost-effective cloning for the
            combinatorial assembly of complex expression constructs.
  JOURNAL   Biotechniques. 2023 Oct;75(4):168-178. doi: 10.2144/btn-2023-0042. 
            Epub 2023 Oct 10.
  PUBMED    37815818
REFERENCE   2  (bases 1 to 3237)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; doi: 
            "10.2144/btn-2023-0042"; journalName: "Biotechniques"; date: 
            "2023-10"; volume: "75"; issue: "4"; pages: "168-178"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3237
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     primer_bind     complement(29..51)
                     /label=pGEX 3'
                     /note="pGEX vectors, reverse primer"
     primer_bind     151..170
                     /label=pRS-marker
                     /note="pRS vectors, use to sequence yeast selectable
                     marker"
     repeat_region   194..228
                     /label=piggyBac left (5') inverted repeat
                     /note="piggyBac transposon-specific inverted terminal
                     repeat sequence (ITR)"
     repeat_region   931..993
                     /label=piggyBac right (3') inverted repeat
                     /note="piggyBac transposon-specific inverted terminal
                     repeat sequence (ITR)"
     primer_bind     complement(1016..1032)
                     /label=M13 rev
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     primer_bind     complement(1016..1032)
                     /label=M13 Reverse
                     /note="In lacZ gene. Also called M13-rev"
     primer_bind     complement(1029..1051)
                     /label=M13/pUC Reverse
                     /note="In lacZ gene"
     protein_bind    1040..1056
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(1064..1094)
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    1109..1130
                     /label=CAP binding site
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(1418..2006)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     primer_bind     complement(1498..1517)
                     /label=pBR322ori-F
                     /note="pBR322 origin, forward primer"
     CDS             complement(2177..3037)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     primer_bind     2800..2819
                     /label=Amp-R
                     /note="Ampicillin resistance gene, reverse primer"
     promoter        complement(3038..3142)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     primer_bind     3210..3228
                     /label=pBRforEco
                     /note="pBR322 vectors, upsteam of EcoRI site, forward
                     primer"