Sfp pet29b C-terminal His Tag 载体 (V017572)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
Sfp pet29b C-terminal His Tag
载体抗性:
Kanamycin
载体长度:
5910 bp
载体类型:
Protein expression
复制子:
ori
宿主:
E. coli
启动子:
T7
5'引物:
T7
感受态:
DH5a
培养温度:
37℃
表达方法:
IPTG induction

Sfp pet29b C-terminal His Tag 载体图谱

Sfp pet29b C-terminal His Tag5910 bp60012001800240030003600420048005400f1 oriKanRoribomropCAP binding sitelacIlacI promoterT7 promoterlac operatorRBSsfp6xHisT7 terminator

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

Sfp pet29b C-terminal His Tag 载体序列

LOCUS       .                       5910 bp    DNA     circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   
VERSION     
KEYWORDS    .
SOURCE      .
  ORGANISM  .
            .
FEATURES             Location/Qualifiers
     rep_origin      12..467
                     /label="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     CDS             complement(563..1375)
                     /label="KanR"
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase"
     rep_origin      1497..2085
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     misc_feature    complement(2271..2413)
                     /label="bom"
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     CDS             complement(2518..2706)
                     /label="rop"
                     /note="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
                     number"
     protein_bind    complement(3481..3502)
                     /label="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     CDS             complement(3518..4597)
                     /label="lacI"
                     /note="lac repressor"
     promoter        complement(4598..4675)
                     /label="lacI promoter"
     promoter        4988..5006
                     /label="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     protein_bind    5007..5031
                     /label="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     RBS             5046..5068
                     /label="RBS"
                     /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
                     T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
     CDS             5076..5747
                     /gene="sfp"
                     /label="sfp"
                     /note="4'-phosphopantetheinyl transferase Sfp from Bacillus
                     subtilis (strain 168). Accession#: P39135"
     CDS             5754..5771
                     /label="6xHis"
                     /note="6xHis affinity tag"
     terminator      5838..5885
                     /label="T7 terminator"
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
                     polymerase"