pBAD33-Tet 载体图谱和序列

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:: pBAD33-Tet

载体抗性:: Chloramphenicol, Tetracycline

载体长度:: 6774 bp

载体类型:: Protein expression, Tetracycline inducible

复制子:: p15A ori

宿主:: E. coli

启动子:: BAD

5'引物:: PBAD30.F

感受态:: DH5a

培养温度:: 37℃

pBAD33-Tet 载体图谱

复制序列 NovoBuilder中查看图谱

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pBAD33-Tet 载体序列

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LOCUS       .                       6774 bp    DNA     circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   
VERSION     
KEYWORDS    .
SOURCE      .
  ORGANISM  .
            .
FEATURES             Location/Qualifiers
     CDS             complement(99..974)
                     /label="araC"
                     /note="L-arabinose regulatory protein"
     promoter        1001..1285
                     /label="araBAD promoter"
                     /note="promoter of the L-arabinose operon of E. coli; the
                     araC regulatory gene is transcribed in the opposite
                     direction (Guzman et al., 1995)"
     misc_feature    1306..1362
                     /label="MCS"
                     /note="pUC18/19 multiple cloning site"
     terminator      1565..1651
                     /label="rrnB T1 terminator"
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
                     gene"
     terminator      1743..1770
                     /label="rrnB T2 terminator"
                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
                     gene"
     promoter        1789..1880
                     /label="AmpR promoter"
     promoter        2130..2234
                     /label="AmpR promoter"
     CDS             2309..3496
                     /label="TcR"
                     /note="tetracycline efflux protein"
     rep_origin      3756..4211
                     /label="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     CDS             complement(4769..5425)
                     /label="CmR"
                     /note="chloramphenicol acetyltransferase"
     promoter        complement(5426..5528)
                     /label="cat promoter"
                     /note="promoter of the E. coli cat gene encoding
                     chloramphenicol acetyltransferase"
     rep_origin      complement(6054..6599)
                     /label="p15A ori"
                     /note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
                     origin of replication can be propagated in E. coli cells
                     that contain a second plasmid with the ColE1 origin."

pBAD33-Tet 载体 (V017641)

pBAD33-Tet 载体图谱

质粒操作方法

pBAD33-Tet 载体序列