pBAD33-Tet 载体 (V017641)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pBAD33-Tet
载体抗性:
Chloramphenicol, Tetracycline
载体长度:
6774 bp
载体类型:
Protein expression, Tetracycline inducible
复制子:
p15A ori
宿主:
E. coli
启动子:
BAD
5'引物:
PBAD30.F
感受态:
DH5a
培养温度:
37℃

pBAD33-Tet 载体图谱

pBAD33-Tet6774 bp3006009001200150018002100240027003000330036003900420045004800510054005700600063006600araCaraBAD promoterMCSrrnB T1 terminatorrrnB T2 terminatorAmpR promoterAmpR promoterTcRf1 oriCmRcat promoterp15A ori

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pBAD33-Tet 载体序列

LOCUS       .                       6774 bp    DNA     circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   
VERSION     
KEYWORDS    .
SOURCE      .
  ORGANISM  .
            .
FEATURES             Location/Qualifiers
     CDS             complement(99..974)
                     /label="araC"
                     /note="L-arabinose regulatory protein"
     promoter        1001..1285
                     /label="araBAD promoter"
                     /note="promoter of the L-arabinose operon of E. coli; the
                     araC regulatory gene is transcribed in the opposite
                     direction (Guzman et al., 1995)"
     misc_feature    1306..1362
                     /label="MCS"
                     /note="pUC18/19 multiple cloning site"
     terminator      1565..1651
                     /label="rrnB T1 terminator"
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
                     gene"
     terminator      1743..1770
                     /label="rrnB T2 terminator"
                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
                     gene"
     promoter        1789..1880
                     /label="AmpR promoter"
     promoter        2130..2234
                     /label="AmpR promoter"
     CDS             2309..3496
                     /label="TcR"
                     /note="tetracycline efflux protein"
     rep_origin      3756..4211
                     /label="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     CDS             complement(4769..5425)
                     /label="CmR"
                     /note="chloramphenicol acetyltransferase"
     promoter        complement(5426..5528)
                     /label="cat promoter"
                     /note="promoter of the E. coli cat gene encoding
                     chloramphenicol acetyltransferase"
     rep_origin      complement(6054..6599)
                     /label="p15A ori"
                     /note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
                     origin of replication can be propagated in E. coli cells
                     that contain a second plasmid with the ColE1 origin."