我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pHSP70-Cas12a-T2A-EGFP
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 8220 bp
- 载体类型:
- Gene-editing vector
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells
- 启动子:
- HSP70
- 5'引物:
- Forward(left ITR)
- 感受态:
- Stbl3
- 培养温度:
- 37℃
pHSP70-Cas12a-T2A-EGFP 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pHSP70-Cas12a-T2A-EGFP 载体序列
LOCUS . 8220 bp DNA circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION
VERSION
KEYWORDS .
SOURCE .
ORGANISM .
.
FEATURES Location/Qualifiers
CDS 407..430
/label="FLAG"
/note="FLAG® epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
CDS 437..457
/label="SV40 NLS"
/note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
CDS 482..4402
/label="AsCpf1"
/note="CRISPR-associated protein from Acidaminococcus sp.
BV3L6 (Zetsche et al., 2015)"
CDS 4520..5233
/label="EGFP"
/note="the original enhanced GFP (Yang et al., 1996)"
polyA_signal 5267..5474
/label="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
repeat_region 5483..5623
/label="AAV2 ITR"
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 5698..6153
/label="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 6435..6539
/label="AmpR promoter"
CDS 6540..7397
/label="AmpR"
/note="β-lactamase"
rep_origin 7571..8159
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"