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pNFAT-pTA-GFP-Neo 载体 (V017910)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pNFAT-pTA-GFP-Neo
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
4804 bp
载体类型:
Transcription factor reporter
复制子:
ori
宿主:
Mammalian cells
筛选标记:
Neo/G418
5'引物:
RVP3
感受态:
DH5a
培养温度:
37℃

pNFAT-pTA-GFP-Neo 载体图谱

pNFAT-pTA-GFP-Neo4804 bp6001200180024003000360042004800minPGFP (S65T)SV40 poly(A) signalSV40 promoterNeoR/KanRpoly(A) signaloriAmpRpause site

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pNFAT-pTA-GFP-Neo 载体序列

LOCUS       .                       4804 bp    DNA     circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   
VERSION     
KEYWORDS    .
SOURCE      .
  ORGANISM  .
            .
FEATURES             Location/Qualifiers
     promoter        177..208
                     /label="minP"
                     /note="minimal TATA-box promoter with low basal activity"
     CDS             241..954
                     /label="GFP (S65T)"
                     /note="S65T variant of Aequorea victoria green fluorescent
                     protein (Heim et al., 1995)"
     polyA_signal    complement(1001..1122)
                     /label="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     promoter        1316..1673
                     /label="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     CDS             1704..2495
                     /label="NeoR/KanR"
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase"
     polyA_signal    2523..2571
                     /label="poly(A) signal"
                     /note="synthetic polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(2898..3486)
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(3689..4546)
                     /label="AmpR"
                     /note="β-lactamase"
     misc_feature    4713..4804
                     /label="pause site"
                     /note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
                     the human α2 globin gene"