RhGC(BE)_pGEM 载体图谱和序列

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:: RhGC(BE)_pGEM

载体抗性:: Ampicillin

载体长度:: 4923 bp

载体类型:: Protein expression

复制子:: ori

宿主:: Mammalian cells

启动子:: T7

5'引物:: M13F

感受态:: DH5a

培养温度:: 37℃

RhGC(BE)_pGEM 载体图谱

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质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

RhGC(BE)_pGEM 载体序列

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LOCUS       .                       4923 bp    DNA     circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   
VERSION     
KEYWORDS    .
SOURCE      .
  ORGANISM  .
            .
FEATURES             Location/Qualifiers
     primer_bind     48..64
                     /label="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     promoter        71..89
                     /label="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     5'UTR           121..163
                     /label="Xenopus globin 5'-UTR"
                     /note="translational enhancer from the 5'-UTR of the major
                     beta-globin gene of Xenopus laevis"
     3'UTR           2089..2214
                     /label="Xenopus globin 3'-UTR"
                     /note="3'-UTR of the major beta-globin gene of Xenopus
                     laevis"
     promoter        complement(2335..2353)
                     /label="SP6 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
     primer_bind     complement(2371..2387)
                     /label="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     protein_bind    complement(2395..2411)
                     /label="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(2419..2449)
                     /label="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    complement(2464..2485)
                     /label="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(2773..3361)
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(3535..4392)
                     /label="AmpR"
                     /note="β-lactamase"
     promoter        complement(4393..4497)
                     /label="AmpR promoter"

RhGC(BE)_pGEM 载体 (V018092)

RhGC(BE)_pGEM 载体图谱

质粒操作方法

RhGC(BE)_pGEM 载体序列