我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- scAAV-CMV-GFP
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5899 bp
- 载体类型:
- Insertion vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Rosas LE, Grieves JL, Zaraspe K, La Perle KM, Fu H, McCarty DM.
- 启动子:
- CMV
scAAV-CMV-GFP 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
scAAV-CMV-GFP 载体序列
LOCUS 40924_48768 5899 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION Insertion vector scAAV-CMV-GFP, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5899)
AUTHORS Rosas LE, Grieves JL, Zaraspe K, La Perle KM, Fu H, McCarty DM.
TITLE Patterns of scAAV Vector Insertion Associated With Oncogenic Events
in a Mouse Model for Genotoxicity
JOURNAL Mol. Ther. (2012) In press
PUBMED 22990674
REFERENCE 2 (bases 1 to 5899)
AUTHORS Rosas LE, Grieves JL, Zaraspe K, La Perle KMD., Fu H, McCarty DM.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (01-AUG-2012) Pediatrics/Center for Gene Therapy, Research
Institute at Nationwide Children's Hospital, 700 Children's Dr,
Columbus, OH 43205, USA
REFERENCE 3 (bases 1 to 5899)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 5899)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Mol. Ther.
(2012) In press"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(01-AUG-2012) Pediatrics/Center for Gene Therapy, Research Institute
at Nationwide Children's Hospital, 700 Children's Dr, Columbus, OH
43205, USA"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5899
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
repeat_region 1..112
/label=AAV2 terminal repeat
/note="AAV2 terminal repeat"
polyA_signal complement(202..313)
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
polyA_signal 405..539
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(555..1271)
/codon_start=1
/label=EGFP
/note="enhanced GFP"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
intron complement(1348..1444)
/label=SV40 intron
/note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor
sites"
promoter complement(1582..1785)
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
enhancer complement(1786..2069)
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer;
contains an 18-bp deletion relative to the standard CMV
enhancer"
repeat_region 2136..2272
/label=AAV2 terminal repeat
/note="AAV2 terminal repeat"
rep_origin 2683..3196
/label=M13 ori
/note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3942..4046
/label=AmpR promoter
CDS 4047..4904
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5078..5666
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"