我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
pCP20 is an ampicillin and CmR plasmid that shows temperature-sensitive replication and thermal induction of FLP synthesis. CmR and KmR mutants were transformed with pCP20, and ampicillin-resistant transformants were selected at 30°C, after which a few were colony-purified once nonselectively at 43°C and then tested for loss of all antibiotic resistances. The majority lost the FRT-flanked resistance gene and the FLP helper plasmid simultaneously. This vector was first published in 1995, by Dr. W. Wackernagel, Genetik, Fachbereich Biologic, University Oldenburg.
- 载体名称:
- pCP20
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 9332 bp
- 载体类型:
- Knockout Vectors
- 复制子:
- pSC101 ori
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
pCP20 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCP20 载体序列
LOCUS V001036 9332 bp DNA circular SYN 13-JAN-2022
DEFINITION Exported.
ACCESSION V001036
VERSION V001036
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 9332)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 9332)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..9332
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
CDS complement(564..1220)
/label="CmR"
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
promoter complement(1221..1323)
/label="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
rep_origin 1875..2097
/label="pSC101 ori"
/note="low-copy replication origin that requires the Rep101
protein"
CDS 2145..3092
/label="Rep101(Ts)"
/note="temperature-sensitive version of the RepA protein
needed for replication with the pSC101 origin (Armstrong et
al., 1984)"
CDS complement(4016..4360)
/gene="mbeC"
/label="Mobilization protein MbeC"
/note="Mobilization protein MbeC from Escherichia coli.
Accession#: P13657"
CDS complement(4560..5417)
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
promoter complement(5418..5522)
/label="AmpR promoter"
CDS complement(6559..7827)
/label="FLP"
/note="site-specific recombinase"
CDS 7928..8638
/label="lambda repressor (ts)"
/note="temperature-sensitive variant of the phage lambda
repressor"