pCG 载体 (V000820)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pCG
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
5015 bp
载体类型:
Mammalian Expression Vectors
复制子:
ori
启动子:
SV40

pCG 载体图谱

pCG5015 bp6001200180024003000360042004800CMV enhancerCMV promoter5'UTRbeta-globin intronHemoglobin subunit betabeta-globin poly(A) signalSV40 promoteroriAmpRAmpR promoterf1 oriM13 fwdT7 promoter

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pCG 载体序列

LOCUS       V000820                 5015 bp    DNA     circular SYN 13-JAN-2022
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V000820
VERSION     V000820
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 5015)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 5015)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5015
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        304..507
                     /label="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
                     promoter"
     5'UTR           597..636
                     /label="HSV TK 5'-UTR"
                     /note="5' untranslated region from the herpes simplex virus
                     thymidine kinase gene"
     intron          704..1276
                     /label="beta-globin intron"
                     /note="intron from rabbit beta-globin gene"
     CDS             1280..1402
                     /gene="HBB"
                     /label="Hemoglobin subunit beta"
                     /note="Hemoglobin subunit beta from Colobus guereza.
                     Accession#: Q9TT33"
     polyA_signal    1473..1528
                     /label="beta-globin poly(A) signal"
                     /note="rabbit beta-globin polyadenylation signal (Gil and
                     Proudfoot, 1987)"
     promoter        complement(1865..2061)
                     /label="SV40 promoter"
                     /note="SV40 early promoter"
     rep_origin      complement(2299..2887)
                     /direction=LEFT
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(3061..3918)
                     /label="AmpR"
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(3919..4023)
                     /label="AmpR promoter"
     rep_origin      complement(4355..4810)
                     /direction=LEFT
                     /label="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     primer_bind     4955..4971
                     /label="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     promoter        4978..4996
                     /label="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     enhancer        5015
                     /label="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"