质粒编号
质粒名称
规格
价格
V000422
RCAS GFP (CT#22)
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- RCAS GFP (CT#22)
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 12448 bp
- 载体类型:
- Retroviral ; avian expression
- 复制子:
- ori
- 拷贝数:
- High Copy
- 启动子:
- RSV
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
- 5'引物:
- RCAS-F
- 感受态:
- DH5a
- 培养温度:
- 37℃
RCAS GFP (CT#22) 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
RCAS GFP (CT#22) 载体序列
LOCUS V000422 12448 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION Exported.
ACCESSION V000422
VERSION V000422
KEYWORDS RCAS GFP (CT#22)
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 12448)
AUTHORS Chen CM, Smith DM, Peters MA, Samson ME, Zitz J, Tabin CJ, Cepko CL
TITLE Production and design of more effective avian
replication-incompetent retroviral vectors.
JOURNAL Dev Biol. 1999 Oct 15. 214(2):370-84.
PUBMED 10525341
REFERENCE 2 (bases 1 to 12448)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 12448)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Dev Biol.
1999 Oct 15. 214(2):370-84."
SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..12448
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
protein_bind complement(634..650)
/label="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(658..688)
/label="lac UV5 promoter"
/note="E. coli lac promoter with an 'up' mutation"
primer_bind complement(731..749)
/label="pBRforEco"
/note="pBR322 vectors, upsteam of EcoRI site, forward
primer"
promoter 817..921
/label="AmpR promoter"
CDS 922..1779
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
rep_origin 1953..2541
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
primer_bind 2695..2712
/label="L4440"
/note="L4440 vector, forward primer"
misc_feature complement(2727..2867)
/label="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
primer_bind 2953..2975
/label="pGEX 3'"
/note="pGEX vectors, reverse primer"
CDS complement(2972..3160)
/label="rop"
/note="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
promoter 4003..4264
/label="RSV promoter"
/note="Rous sarcoma virus enhancer/promoter"
CDS 6340..6711
/gene="gag"
/label="Proteinase p15"
/note="Proteinase p15 from Avian myeloblastosis associated
virus. Accession#: P26315"
CDS 10372..11109
/gene="env"
/label="Envelope glycoprotein gp95"
/note="Envelope glycoprotein gp95 from Rous sarcoma virus
subgroup A (strain Schmidt-Ruppin). Accession#: P0DTM5"
CDS 11312..12028
/label="EGFP"
/note="enhanced GFP"
promoter 12222..12448
/label="RSV promoter"
/note="Rous sarcoma virus enhancer/promoter"