我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pEVOL-pBpF
- 载体抗性:
- Chloramphenicol
- 载体长度:
- 6128 bp
- 载体类型:
- Bacterial Expression
- 复制子:
- p15A ori
- 拷贝数:
- High Copy
- 启动子:
- araBAD
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
- 5'引物:
- ATTAGCGGATCCTACCTGACGCTTTTTATCGCAACTCTCTACTGTTTCTCCATACCCGTTTTTT
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
pEVOL-pBpF 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pEVOL-pBpF 载体序列
LOCUS V012597 6128 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION Exported.
ACCESSION V012597
VERSION V012597
KEYWORDS pEVOL-pBpF
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 6128)
AUTHORS Chin JW, Martin AB, King DS, Wang L, Schultz PG
TITLE Addition of a photocrosslinking amino acid to the genetic code of
Escherichiacoli.
JOURNAL Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Aug 20;99(17):11020-4. Epub 2002 Aug
1.
PUBMED 12154230
REFERENCE 2 (bases 1 to 6128)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6128)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Proc Natl
Acad Sci U S A."; date: "2002-08-20"; volume: "99(17)"; pages:
"11020-4. Epub 2002 Aug 1"
SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6128
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 22..306
/label="araBAD promoter"
/note="promoter of the L-arabinose operon of E. coli; the
araC regulatory gene is transcribed in the opposite
direction (Guzman et al., 1995)"
CDS 343..1260
/gene="tyrS"
/label="Tyrosine--tRNA ligase"
/note="Tyrosine--tRNA ligase from Methanocaldococcus
jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM
10045 / NBRC 100440). Accession#: Q57834"
CDS 1273..1290
/label="6xHis"
/note="6xHis affinity tag"
primer_bind complement(1346..1363)
/label="pBAD Reverse"
/note="For vectors with E. coli araBAD promoter, reverse
primer"
CDS 1690..2607
/gene="tyrS"
/label="Tyrosine--tRNA ligase"
/note="Tyrosine--tRNA ligase from Methanocaldococcus
jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM
10045 / NBRC 100440). Accession#: Q57834"
CDS complement(3269..3925)
/label="CmR"
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
promoter complement(3926..4028)
/label="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
primer_bind complement(4420..4437)
/label="L4440"
/note="L4440 vector, forward primer"
rep_origin complement(4554..5099)
/direction=LEFT
/label="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
CDS complement(5248..6123)
/label="araC"
/note="L-arabinose regulatory protein"