首页技术支持质粒载体

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pEE12.4
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
7569 bp
载体类型:
Mammalian Expression Vectors
复制子:
ori
载体来源:
Lonza biologics
筛选标记:
GS(Glutamine Synthetase)
拷贝数:
High copy number
启动子:
SV40
克隆方法:
Enzyme Cut
5'引物:
CMV fwd
表达方法:
Constiutive, Stable

pEE12.4 载体图谱

pEE12.47569 bp3006009001200150018002100240027003000330036003900420045004800510054005700600063006600690072007500SV40 poly(A) signaloriAmpRAmpR promoterT7Te terminatorSV40 promoterGlutamine synthetasesmall t intronSV40 NLSSV40 poly(A) signalCMV enhancerCMV promoterCMV intron A

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pEE12.4 载体序列

LOCUS       V012681                 7569 bp    DNA     circular SYN 23-SEP-2020
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V012681
VERSION     V012681
KEYWORDS    pEE12.4
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 7569)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 7569)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7569
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     polyA_signal    116..237
                     /label="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(999..1587)
                     /direction=LEFT
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(1761..2618)
                     /label="AmpR"
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(2619..2723)
                     /label="AmpR promoter"
     terminator      2892..2919
                     /label="T7Te terminator"
                     /note="phage T7 early transcription terminator"
     promoter        3002..3331
                     /label="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     CDS             3370..4488
                     /gene="GLUL"
                     /label="Glutamine synthetase"
                     /note="Glutamine synthetase from Acomys cahirinus.
                     Accession#: Q9QY94"
     intron          4623..4688
                     /label="small t intron"
                     /note="SV40 (simian virus 40) small t antigen intron"
     CDS             4818..4838
                     /label="SV40 NLS"
                     /note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
                     40) large T antigen"
     polyA_signal    5263..5397
                     /label="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     enhancer        5966..6345
                     /label="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        6346..6549
                     /label="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
                     promoter"
     intron          6685..7511
                     /label="CMV intron A"
                     /note="human cytomegalovirus intron A (Chapman et al.,
                     1991)"