首页技术支持质粒载体

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

pCEP4 vector is designed for high-level, constitutive expression from either the CMV or RSV promoters. Both vectors contain the EBNA-1 gene for episomal expression in primate and canine cell lines.

载体名称:
pCEP4
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
10188 bp
载体类型:
Mammalian Expression Vectors
复制子:
ori
载体来源:
Thermo Fisher Scientific
筛选标记:
Hygromycin
拷贝数:
High copy number
启动子:
CMV
克隆方法:
Enzyme Cut
表达方法:
Constiutive, Stable / Transient

pCEP4 载体图谱

pCEP410188 bp50010001500200025003000350040004500500055006000650070007500800085009000950010000CMV enhancerCMV promoterSV40 poly(A) signaloriPEBNA1AmpR promoterAmpRoriHSV TK promoterHygRHSV TK poly(A) signal

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pCEP4 载体序列

LOCUS       40924_10391       10188 bp DNA     circular SYN 28-JAN-2021
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 10188)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 10188)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..10188
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     enhancer        4..383
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        384..587
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
                     promoter"
     polyA_signal    complement(672..806)
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(1531..3320)
                     /direction=LEFT
                     /label=oriP
                     /note="Epstein-Barr virus oriP replication origin (Yates et
                     al., 2000)"
     CDS             complement(3625..5547)
                     /codon_start=1
                     /label=EBNA1
                     /note="Epstein-Barr nuclear antigen 1, also known as
                     EBNA-1"
                     /translation="MSDEGPGTGPGNGLGEKGDTSGPEGSGGSGPQRRGGDNHGRGRGR
                     GRGRGGGRPGAPGGSGSGPRHRDGVRRPQKRPSCIGCKGTHGGTGAGAGAGGAGAGGAG
                     AGGGAGAGGGAGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGAGGGA
                     GGAGGAGAGGGAGAGGGAGGAGAGGGAGGAGGAGAGGGAGAGGAGGAGGAGAGGAGAGG
                     GAGGAGGAGAGGAGAGGAGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGGAGGAGAG
                     GGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGAGGAGAGGGAGAGGAGAGGGGRGRGGSGGRGRG
                     GSGGRGRGGSGGRRGRGRERARGGSRERARGRGRGRGEKRPRSPSSQSSSSGSPPRRPP
                     PGRRPFFHPVGEADYFEYHQEGGPDGEPDVPPGAIEQGPADDPGEGPSTGPRGQGDGGR
                     RKKGGWFGKHRGQGGSNPKFENIAEGLRALLARSHVERTTDEGTWVAGVFVYGGSKTSL
                     YNLRRGTALAIPQCRLTPLSRLPFGMAPGPGPQPGPLRESIVCYFMVFLQTHIFAEVLK
                     DAIKDLVMTKPAPTCNIRVTVCSFDDGVDLPPWFPPMVEGAAAEGDDGDDGDEGGDGDE
                     GEEGQE"
     promoter        6068..6172
                     /label=AmpR promoter
     CDS             6173..7030
                     /codon_start=1
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      7204..7792
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     promoter        8223..8368
                     /label=HSV TK promoter
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase promoter"
     CDS             8411..9445
                     /codon_start=1
                     /label=HygR
                     /note="hygromycin B phosphotransferase"
                     /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
                     YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
                     ETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
                     TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
                     GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
                     NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPDRE
                     MGEAN"
     polyA_signal    9490..9538
                     /label=HSV TK poly(A) signal
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase
                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"