我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pET28a-PPK
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 7297 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- E. coli
- 启动子:
- T7
- 感受态:
- DH5a
- 培养温度:
- 37℃
pET28a-PPK 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pET28a-PPK 载体序列
LOCUS V013182 7297 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Exported.
ACCESSION V013182
VERSION V013182
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 7297)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7297
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
terminator complement(26..73)
/label="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/label="6xHis"
/note="6xHis affinity tag"
CDS complement(164..2227)
/gene="ppk"
/label="Polyphosphate kinase"
/note="Polyphosphate kinase from Escherichia coli O157:H7.
Accession#: P0A7B2"
RBS complement(2234..2256)
/label="RBS"
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind complement(2271..2295)
/label="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2296..2314)
/label="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 2623..2700
/label="lacI promoter"
CDS 2701..3780
/label="lacI"
/note="lac repressor"
protein_bind 3796..3817
/label="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
CDS 4592..4780
/label="rop"
/note="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
misc_feature 4885..5027
/label="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(5213..5801)
/direction=LEFT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 5923..6735
/label="KanR"
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
rep_origin complement(6831..7286)
/direction=LEFT
/label="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"