pINFUSE-hIgG2-Fc2 载体 (V013928)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pINFUSE-hIgG2-Fc2
载体抗性:
Bleomycin
载体长度:
4421 bp
载体类型:
Protein expression, Antibody expression
复制子:
ori
宿主:
Mammalian cells
筛选标记:
Zeo
启动子:
EF-1α core
感受态:
DH5a
培养温度:
37℃

pINFUSE-hIgG2-Fc2 载体图谱

pINFUSE-hIgG2-Fc24421 bp600120018002400300036004200EF-1-alpha core promoter5' LTR (truncated)IL-2 signal sequenceSV40 poly(A) signalbeta-globin poly(A)BleoRCMV enhanceroripoly(A) signalpause site

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pINFUSE-hIgG2-Fc2 载体序列

LOCUS       62056_12890        4421 bp DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4421)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4421
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        31..242
                     /label=EF-1-alpha core promoter
                     /note="core promoter for human elongation factor 
                     EF-1-alpha"
     LTR             255..523
                     /label=5' LTR (truncated)
                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from human
                     T-cell leukemia virus (HTLV) type 1"
     sig_peptide     573..632
                     /label=IL-2 signal sequence
                     /note="human interleukin-2 signal sequence"
     polyA_signal    complement(1586..1707)
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     polyA_signal    complement(1811..2205)
                     /label=beta-globin poly(A)
                     /note="human beta-globin polyadenylation signal"
     CDS             complement(2222..2593)
                     /codon_start=1
                     /label=BleoR
                     /note="antibiotic-binding protein"
                     /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
                     VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
                     EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
     enhancer        complement(3186..3489)
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     rep_origin      complement(3569..4157)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     polyA_signal    4265..4313
                     /label=poly(A) signal
                     /note="synthetic polyadenylation signal"
     misc_feature    4324..4415
                     /label=pause site
                     /note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
                     the human alpha-2 globin gene"