我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pDestTol2pA2-U6:gRNA
- 载体抗性:
- Chloramphenicol, Ampicillin
- 载体长度:
- 6352 bp
- 载体类型:
- CRISPR ; Tol2 destination vector for Gateway
- 复制子:
- ori
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
- 5'引物:
- GAGGATCATAATCAGCCATA
pDestTol2pA2-U6:gRNA 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pDestTol2pA2-U6:gRNA 载体序列
LOCUS 40924_14495 6352 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION Destination vector for Gateway based on vector #394 from the
Tol2Kit, containing a gRNA scaffold under the control of a zebrafish
U6 promoter..
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6352)
AUTHORS Ablain J, Durand EM, Yang S, Zhou Y, Zon LI
TITLE A CRISPR/Cas9 Vector System for Tissue-Specific Gene Disruption in
Zebrafish.
JOURNAL Dev Cell. 2015 Mar 4. pii: S1534-5807(15)00075-1. doi:
10.1016/j.devcel.2015.01.032.
PUBMED 25752963
REFERENCE 2 (bases 1 to 6352)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6352)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Dev Cell.
2015 Mar 4. pii: S1534-5807(15)00075-1. doi:
10.1016/j.devcel.2015.01.032."
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6352
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 20..124
/label=AmpR promoter
CDS 125..982
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 1156..1744
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
primer_bind 1898..1915
/label=L4440
/note="L4440 vector, forward primer"
protein_bind 2032..2053
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 2068..2098
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 2106..2122
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 2130..2146
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 2167..2185
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
primer_bind 2222..2238
/label=SK primer
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
polyA_signal 2910..3044
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
misc_RNA 3443..3518
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
primer_bind 3531..3547
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3555..3678
/label=attR3
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
promoter 3703..3733
/label=lac UV5 promoter
/note="E. coli lac promoter with an 'up' mutation"
CDS 3787..4464
/codon_start=1
/label=CmR
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQAGRNLE
DPAY"
CDS 4787..5089
/codon_start=1
/label=ccdB
/note="CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase"
/translation="MQFKVYTYKRESRYRLFVDVQSDIIDTPGRRMVIPLASARLLSDK
VPRELYPVVHIGDESWRMMTTDMASVPVSVIGEEVADLSHRENDIKNAINLMFWGI"
protein_bind complement(5133..5257)
/label=attR4
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
primer_bind complement(5276..5292)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
primer_bind 6188..6209
/label=F1ori-F
/note="F1 origin, forward primer"