我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pBABE-puro mCherry-EGFP-LC3B
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 6952 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression, Retroviral
- 复制子:
- ori
- 筛选标记:
- Puromycin
- 拷贝数:
- High Copy
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
pBABE-puro mCherry-EGFP-LC3B 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pBABE-puro mCherry-EGFP-LC3B 载体序列
LOCUS 40924_5424 6952 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION retroviral expression of mCherry, EGFP-tagged LC3.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6952)
AUTHORS N'Diaye EN, Kajihara KK, Hsieh I, Morisaki H, Debnath J, Brown EJ
TITLE PLIC proteins or ubiquilins regulate autophagy-dependent cell
survival during nutrient starvation.
JOURNAL EMBO Rep. 2009 Feb;10(2):173-9. doi: 10.1038/embor.2008.238. Epub
2009 Jan 16.
PUBMED 19148225
REFERENCE 2 (bases 1 to 6952)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6952)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; doi:
"10.1038/embor.2008.238"; journalName: "EMBO Rep"; date: "2009-02";
volume: "10"; issue: "2"; pages: "173-9"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6952
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
LTR 1..470
/label=LTR
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 535..734
/label=MMLV Psi
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 935..1351
/codon_start=1
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
/translation="GQTVTTPLSLTLGHWKDVERIAHNQSVDVKKRRWVTFCSAEWPTF
NVGWPRDGTFNRDLITQVKIKVFSPGPHGHPDQVPYIVTWEALAFDPPPWVKPFVHPKP
PPPLPPSAPSLPLEPPRSTPPRSSLYPALTPSLGA"
CDS 1368..2075
/codon_start=1
/label=mCherry
/note="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK
GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
protein_bind 2103..2127
/label=attB1
/note="recombination site for the Gateway(R) BP reaction"
CDS 2142..2858
/codon_start=1
/label=EGFP
/note="enhanced GFP"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
CDS 2886..3260
/codon_start=1
/gene="MAP1LC3B"
/product="human LC3 protein"
/label=LC3B
/note="Atg8 family member found on autophagosomes"
/translation="MPSEKTFKQRRTFEQRVEDVRLIREQHPTKIPVIIERYKGEKQLP
VLDKTKFLVPDHVNMSELIKIIRRRLQLNANQAFFLLVNGHSMVSVSTPISEVYESEKD
EDGFLYMVYASQETFGMKLSV"
promoter 3280..3609
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 3619..4215
/codon_start=1
/label=PuroR
/note="puromycin N-acetyltransferase"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
LTR 4317..4908
/label=LTR
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
primer_bind complement(5038..5055)
/label=L4440
/note="L4440 vector, forward primer"
rep_origin complement(5209..5797)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5960..6817)
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6818..6922)
/label=AmpR promoter