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pBCGE2 载体 (V009248)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pBCGE2
载体抗性:
Kanamycin
载体长度:
7872 bp
载体类型:
Expression vector
复制子:
ori
载体来源:
Govan VA, Williamson AL.

pBCGE2 载体图谱

pBCGE27872 bp30060090012001500180021002400270030003300360039004200450048005100540057006000630066006900720075007800KanRoriThymidylate kinaseRegulatory protein E2rrnB T1 terminator

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pBCGE2 载体序列

LOCUS       V009248                 7872 bp    DNA     circular SYN 17-DEC-2018
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V009248
VERSION     V009248
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 7872)
  AUTHORS   Govan VA, Williamson AL.
  TITLE     Rabbits immunised with recombinant BCG expressing the cottontail
            rabbit papillomavirus (CRPV) L2E7E2 genes induces regression of
            established papillomas
  JOURNAL   Virus Res. 127 (1), 43-48 (2007)
   PUBMED   17451831
REFERENCE   2  (bases 1 to 7872)
  AUTHORS   Govan VA, Williamson A-L.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (10-DEC-2006) Institute of Infectious Disease and
            Molecular Medicine, University of Cape Town, Anzio Road,
            Observatory, Cape Town 7925, South Africa
REFERENCE   3  (bases 1 to 7872)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 7872)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Virus
            Res."; date: "2007"; volume: "127"; issue: "1"; pages: "43-48"
            SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
            (10-DEC-2006) Institute of Infectious Disease and Molecular
            Medicine, University of Cape Town, Anzio Road, Observatory, Cape
            Town 7925, South Africa"
            SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7872
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     CDS             1877..2689
                     /label="KanR"
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase"
     rep_origin      3024..3612
                     /direction=RIGHT
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             5698..6330
                     /gene="tmk"
                     /label="Thymidylate kinase"
                     /note="Thymidylate kinase from Mycobacterium tuberculosis
                     (strain ATCC 25618 / H37Rv). Accession#: P9WKE1"
     CDS             6556..7725
                     /gene="E2"
                     /label="Regulatory protein E2"
                     /note="Regulatory protein E2 from Cottontail rabbit
                     papillomavirus (strain Kansas). Accession#: P03121"
     terminator      7790..7836
                     /label="rrnB T1 terminator"
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
                     gene"