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pdLucFXR 载体 (V007990)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pdLucFXR
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
10961 bp
载体类型:
Cloning vector
复制子:
ori
载体来源:
Houten SM, Volle DH, Cummins CL, Mangelsdorf DJ, Auwerx J.

pdLucFXR 载体图谱

pdLucFXR10961 bp5001000150020002500300035004000450050005500600065007000750080008500900095001000010500M13 fwdf1 oriAmpR promoterAmpRoriCAP binding sitelac promoterlac operatorM13 revSP6 promoterbeta-globin insulatorbeta-globin insulator5X UASFXR binding siteWnt-1 promoterluciferaseSV40 poly(A) signal3' flanking sequence of Wnt-1

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pdLucFXR 载体序列

LOCUS       40924_14755       10961 bp DNA     circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION  Cloning vector pdLucFXR, complete sequence.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 10961)
  AUTHORS   Houten SM, Volle DH, Cummins CL, Mangelsdorf DJ, Auwerx J.
  TITLE     In vivo imaging of farnesoid X receptor activity reveals the ileum 
            as the primary bile acid signaling tissue
  JOURNAL   Mol. Endocrinol. 21 (6), 1312-1323 (2007)
  PUBMED    17426284
REFERENCE   2  (bases 1 to 10961)
  AUTHORS   Houten SM, Auwerx J.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (21-APR-2004) Institut de Genetique et de Biologie 
            Moleculaire et Cellulaire, 1 rue Laurent Fries, Illkirch 67404, 
            France
REFERENCE   3  (bases 1 to 10961)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 10961)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Mol. 
            Endocrinol."; date: "2007"; volume: "21"; issue: "6"; pages: 
            "1312-1323"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (21-APR-2004) Institut de Genetique et de Biologie Moleculaire et 
            Cellulaire, 1 rue Laurent Fries, Illkirch 67404, France"
COMMENT     SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..10961
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     primer_bind     complement(24..40)
                     /label=M13 fwd
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     rep_origin      181..636
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        714..818
                     /label=AmpR promoter
     CDS             819..1676
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     rep_origin      1850..2438
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     protein_bind    2726..2747
                     /label=CAP binding site
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     promoter        2762..2792
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    2800..2816
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     primer_bind     2824..2840
                     /label=M13 rev
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     promoter        2858..2876
                     /label=SP6 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
     misc_feature    2902..4124
                     /label=beta-globin insulator
                     /note="beta-globin insulator"
     misc_feature    4125..5334
                     /label=beta-globin insulator
                     /note="beta-globin insulator"
     protein_bind    5385..5479
                     /label=5X UAS
                     /note="five tandem copies of the 'ScaI site' 17-mer 
                     CGGAGTACTGTCCTCCG, an upstream activating sequence (UAS) 
                     that efficiently binds yeast Gal4 (Webster et al., 1988; 
                     Pfeiffer et al., 2010)"
     protein_bind    5510..5595
                     /label=FXR binding site
                     /bound_moiety="FXR"
     regulatory      5614..6723
                     /label=Wnt-1 promoter
                     /note="Wnt-1 promoter"
                     /regulatory_class="promoter"
     CDS             6765..8414
                     /label=luciferase
                     /note="firefly luciferase"
     polyA_signal    complement(8611..8732)
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     misc_feature    8844..10934
                     /label=3' flanking sequence of Wnt-1
                     /note="3' flanking sequence of Wnt-1"