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pE-FLP 载体 (V007705)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pE-FLP
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
4389 bp
载体类型:
FLP expression vector
复制子:
pSC101 ori
载体来源:
St-Pierre F, Cui L, Priest DG, Endy D, Dodd IB, Shearwin KE.

pE-FLP 载体图谱

pE-FLP4389 bp600120018002400300036004200pE promoter from phage P2RBSFLPRep101pSC101 oriAmpRAmpR promoter

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pE-FLP 载体序列

LOCUS       40924_16400        4389 bp DNA     circular SYN 17-DEC-2018
DEFINITION  FLP expression vector pE-FLP, complete sequence.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4389)
  AUTHORS   St-Pierre F, Cui L, Priest DG, Endy D, Dodd IB, Shearwin KE.
  TITLE     One-step cloning and chromosomal integration of DNA
  JOURNAL   ACS Synth Biol 2 (9), 537-541 (2013)
  PUBMED    24050148
REFERENCE   2  (bases 1 to 4389)
  AUTHORS   St-Pierre F, Cui L, Priest DG, Endy D, Dodd IB, Shearwin KE.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (12-MAY-2013) Molecular and Biomedical Science, The 
            University of Adelaide, Molecular Life Sciences Building, Adelaide, 
            South Australia 5005, Australia
REFERENCE   3  (bases 1 to 4389)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 4389)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "ACS Synth 
            Biol"; date: "2013"; volume: "2"; issue: "9"; pages: "537-541"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (12-MAY-2013) Molecular and Biomedical Science, The University of 
            Adelaide, Molecular Life Sciences Building, Adelaide, South 
            Australia 5005, Australia"
COMMENT     SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4389
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     regulatory      1..69
                     /label=pE promoter from phage P2
                     /note="pE promoter from phage P2"
                     /regulatory_class="promoter"
     RBS             76..84
                     /label=Shine-Dalgarno sequence
                     /note="full consensus sequence for ribosome-binding sites 
                     upstream of start codons in E. coli; complementary to a 
                     region in the 3' end of the 16S rRNA (Chen et al., 1994)"
     CDS             88..1356
                     /label=FLP
                     /note="site-specific recombinase"
     CDS             complement(1559..2506)
                     /label=Rep101
                     /note="RepA protein needed for replication with the pSC101 
                     origin"
     rep_origin      complement(2554..2776)
                     /direction=LEFT
                     /label=pSC101 ori
                     /note="low-copy replication origin that requires the Rep101
                     protein"
     CDS             complement(3401..4258)
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(4259..4363)
                     /label=AmpR promoter