质粒编号
质粒名称
规格
价格
V007150
pLBH559_Tet-HisCas14a1Locus
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pLBH559_Tet-HisCas14a1Locus
- 载体抗性:
- Chloramphenicol
- 载体长度:
- 4670 bp
- 载体类型:
- Bacterial Expression, CRISPR
- 复制子:
- p15A ori
- 拷贝数:
- Low Copy
- 启动子:
- Tet
- 克隆方法:
- Gibson Cloning
- 5'引物:
- gtgccgatcaacgtAtcattttcg
- 3'引物:
- acgcagaaaggcccacccgaag
pLBH559_Tet-HisCas14a1Locus 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pLBH559_Tet-HisCas14a1Locus 载体序列
LOCUS V007150 4670 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION Exported.
ACCESSION V007150
VERSION V007150
KEYWORDS pLBH559_Tet-HisCas14a1Locus
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 4670)
AUTHORS Harrington LB, Burstein D, Chen JS, Paez-Espino D, Ma E, Witte IP,
Cofsky JC, Kyrpides NC, Banfield JF, Doudna JA
TITLE Programmed DNA destruction by miniature CRISPR-Cas14 enzymes.
JOURNAL Science. 2018 Oct 18. pii: science.aav4294. doi:
10.1126/science.aav4294.
PUBMED 30337455
REFERENCE 2 (bases 1 to 4670)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 4670)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Science.
2018 Oct 18. pii: science.aav4294. doi: 10.1126/science.aav4294."
SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4670
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 16..71
/label="tetR/tetA promoters"
/note="overlapping promoters for bacterial tetR and tetA"
RBS 89..100
/note="strong bacterial ribosome binding site (Elowitz and
Leibler, 2000)"
CDS 116..133
/label="6xHis"
/note="6xHis affinity tag"
CDS 134..154
/label="TEV site"
/note="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
cleavage site"
CDS 170..1756
/gene="cas12f"
/label="CRISPR-associated endodeoxyribonuclease Cas12f1"
/note="CRISPR-associated endodeoxyribonuclease Cas12f1 from
Uncultured archaeon. Accession#: A0A482D308"
terminator 2289..2316
/label="T7Te terminator"
/note="phage T7 early transcription terminator"
primer_bind complement(2344..2361)
/label="L4440"
/note="L4440 vector, forward primer"
rep_origin complement(2478..3023)
/direction=LEFT
/label="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
terminator complement(3137..3231)
/label="lambda t0 terminator"
/note="transcription terminator from phage lambda"
CDS complement(3255..3911)
/label="CmR"
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
promoter complement(3912..4014)
/label="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
CDS complement(4047..4670)
/label="TetR"
/note="tetracycline repressor TetR"