我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
AAVS1 donor vector for genomic targeting
- 载体名称:
- AAVS1-Neo-M2rtTA
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 10080 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression Vectors
- 复制子:
- ori
- 筛选标记:
- Neomycin (select with G418)
- 启动子:
- CAG
AAVS1-Neo-M2rtTA 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
AAVS1-Neo-M2rtTA 载体序列
LOCUS 40924_170 10080 bp DNA circular SYN 13-JAN-2022
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 10080)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 10080)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..10080
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
misc_feature 33..836
/label=HA-L
/note="left homology arm from the adeno-associated virus
integration site (AAVS1) within intron 1 of the human
PPP1R12C gene"
misc_feature 843..868
/label=SA
/note="splice acceptor site"
CDS 892..945
/label=T2A
/note="2A peptide from Thosea asigna virus capsid protein"
CDS 961..1761
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
polyA_signal 1836..2291
/label=PGK poly(A) signal
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 polyadenylation
signal"
enhancer 2389..2692
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2694..2971
/note="chicken beta-actin promoter"
intron 2973..3990
/label=chimeric intron
/note="chimera between introns from chicken beta-actin and
rabbit beta-globin"
CDS 4090..4833
/label=rtTA-Advanced
/note="improved tetracycline-controlled transactivator"
polyA_signal complement(4846..4980)
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
misc_feature 5310..6146
/label=HA-R
/note="right homology arm from the adeno-associated virus
integration site (AAVS1) within intron 1 of the human
PPP1R12C gene"
promoter complement(6187..6205)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind complement(6212..6228)
/label=M13 fwd
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 6366..6665
/label=ccdB
/note="CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase"
CDS complement(8068..8925)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
rep_origin 9049..9637
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind 9925..9946
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 9961..9991
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 9999..10015
/label=lac repressor encoded by lacI binding site
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 10023..10039
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 10060..10078
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"