pFA6a-myc-KlURA3 载体 (V006328)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pFA6a-myc-KlURA3
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
4653 bp
载体类型:
Yeast tagging vector
复制子:
ori
载体来源:
Sung M-K., Huh W-K.

pFA6a-myc-KlURA3 载体图谱

pFA6a-myc-KlURA34653 bp600120018002400300036004200MycMycMycMycMycURA3TEF terminatorT7 promoteroriAmpRAmpR promoterSP6 promoter

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pFA6a-myc-KlURA3 载体序列

LOCUS       40924_19516        4653 bp DNA     circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION  Yeast tagging vector pFA6a-myc-KlURA3, complete sequence.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4653)
  AUTHORS   Sung M-K., Huh W-K.
  TITLE     Yeast tagging vector pFA6a-myc-KlURA3
  JOURNAL   Unpublished
REFERENCE   2  (bases 1 to 4653)
  AUTHORS   Sung M-K., Huh W-K.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (17-OCT-2007) School of Biological Sciences, Seoul 
            National University, Seoul 151-747, Republic of Korea
REFERENCE   3  (bases 1 to 4653)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 4653)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: 
            "Unpublished"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (17-OCT-2007) School of Biological Sciences, Seoul National 
            University, Seoul 151-747, Republic of Korea"
COMMENT     SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4653
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     CDS             66..95
                     /codon_start=1
                     /label=Myc
                     /note="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
                     /translation="EQKLISEEDL"
     CDS             102..131
                     /codon_start=1
                     /product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
                     /label=Myc
                     /translation="EQKLISEEDL"
     CDS             147..176
                     /codon_start=1
                     /product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
                     /label=Myc
                     /translation="EQKLISEEDL"
     CDS             183..212
                     /codon_start=1
                     /product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
                     /label=Myc
                     /translation="EQKLISEEDL"
     CDS             219..248
                     /codon_start=1
                     /product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
                     /label=Myc
                     /translation="EQKLISEEDL"
     CDS             890..1693
                     /codon_start=1
                     /gene="URA3"
                     /product="orotidine 5'-phosphate decarboxylase"
                     /label=URA3
                     /protein_id="ABX47175.1"
                     /translation="MSTKSYTSRAETHASPVASKLLRLMDEKKTNLCASLDVRSTDELL
                     KLVETLGPYICLLKTHVDILDDFSYEGTVVPLKALAEKYKFLIFEDRKFADIGNTVKLQ
                     YTSGVYRIAEWSDITNAHGVTGAGIVAGLKQGAQEVTKEPRGLLMLAELSSKGSLAHGE
                     YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQNDMGGREEGFDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDE
                     VVSGGSDIIIVGRGLFAKGRDPKVEGERYRNAGWEAYQKRISAPH"
     gene            890..1693
                     /gene="URA3"
                     /label=URA3
     terminator      1989..2186
                     /label=TEF terminator
                     /note="Ashbya gossypii TEF terminator"
     promoter        complement(2291..2309)
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     rep_origin      complement(2567..3155)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(3329..4186)
                     /codon_start=1
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(4187..4291)
                     /label=AmpR promoter
     promoter        4637..4653
                     /label=SP6 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"