质粒编号
质粒名称
规格
价格
V004047
pPRIME-TREX-GFP-FF3
5 μg
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Lentiviral expression vector for shRNA expression with inducible (TREX) promter, fluorescent (GFP) marker; amp and chloramphenicol restsance; restriction enzyme cloning.
- 载体名称:
- pPRIME-TREX-GFP-FF3
- 载体抗性:
- Chloramphenicol
- 载体长度:
- 8600 bp
- 载体类型:
- Lentiviral vectors
- 复制子:
- ori
- 拷贝数:
- Low copy number
- 启动子:
- TREX
- 克隆方法:
- Enzyme digestion and ligation
- 5'引物:
- EGFP-C Foward: CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG
- 载体标签:
- GFP
pPRIME-TREX-GFP-FF3 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pPRIME-TREX-GFP-FF3 载体序列
LOCUS V004047 8600 bp DNA circular SYN 13-JAN-2022
DEFINITION Exported.
ACCESSION V004047
VERSION V004047
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 8600)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 8600)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8600
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 238..617
/label="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
misc_feature 1023..1148
/label="HIV-1 Psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 1645..1878
/label="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
CDS 2063..2107
/label="gp41 peptide"
/note="antigenic peptide corresponding to amino acids 655
to 669 of the HIV envelope protein gp41 (Lutje Hulsik et
al., 2013)"
CDS 2256..2297
/note="Protein Tat from Human immunodeficiency virus type 1
group M subtype B (isolate WMJ22). Accession#: P12509"
/label="Protein Tat"
misc_feature 2405..2522
/label="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1"
enhancer 2681..2984
/label="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2985..3188
/label="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
protein_bind 3190..3208
/label="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
protein_bind 3211..3229
/gene="tetO"
/label="tetracycline repressor TetR binding site"
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tet operator"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
CDS 3302..4018
/label="EGFP"
/note="enhanced GFP"
ncRNA 4071..4164
/label="5' miR-30a"
/note="sequence upstream of the 71-nt precursor of the
human miR-30a microRNA (Zeng et al., 2002)"
ncRNA 4178..4290
/label="3' miR-30a"
/note="sequence downstream of the 71-nt precursor of the
human miR-30a microRNA (Zeng et al., 2002)"
promoter 4443..4545
/label="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
CDS 4546..5202
/label="CmR"
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
CDS 5337..5366
/label="Myc"
/note="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
misc_feature 5489..6077
/label="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
primer_bind complement(6080..6096)
/label="KS primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
LTR 6606..6786
/label="5' LTR (truncated)"
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
rep_origin complement(6848..7436)
/direction=LEFT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7610..8467)
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
promoter complement(8468..8572)
/label="AmpR promoter"