我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pPLV04_v2
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 6753 bp
- 载体类型:
- Cloning vector
- 复制子:
- pSa ori
- 载体来源:
- Wendrich JR, Liao CY, van den Berg WA, De Rybel B, Weijers D.
pPLV04_v2 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pPLV04_v2 载体序列
LOCUS 40924_35099 6753 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION Cloning vector pPLV04_v2, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6753)
AUTHORS Wendrich JR, Liao CY, van den Berg WA, De Rybel B, Weijers D.
TITLE Ligation-independent cloning for plant research
JOURNAL Methods Mol. Biol. 1284, 421-431 (2015)
PUBMED 25757785
REFERENCE 2 (bases 1 to 6753)
AUTHORS Wendrich JR, Liao C-Y., van den Berg WAM., De Rybel B, Weijers D.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (25-JUN-2014) Laboratory of Biochemistry, Wageningen
University, Dreijenlaan 3, Wageningen 6703HA, The Netherlands
REFERENCE 3 (bases 1 to 6753)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 6753)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Methods
Mol. Biol. 1284, 421-431 (2015)"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(25-JUN-2014) Laboratory of Biochemistry, Wageningen University,
Dreijenlaan 3, Wageningen 6703HA, The Netherlands"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6753
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
rep_origin complement(66..654)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(828..1640)
/label=KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
rep_origin 1931..2366
/label=pSa ori
/note="origin of replication from bacterial plasmid pSa"
misc_feature 2493..2515
/label=LB T-DNA repeat
/note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA
(truncated)"
terminator complement(2539..2791)
/label=NOS terminator
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
CDS complement(2834..3625)
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
promoter complement(3659..3838)
/label=NOS promoter
/note="nopaline synthase promoter"
primer_bind 4085..4101
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 4111..4129
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind 4155..4171
/label=KS primer
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
misc_feature 4192..4221
/note="LIC; ligation-independent cloning (LIC) site"
CDS 4234..4254
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
/label=SV40 NLS
/translation="PKKKRKV"
CDS 4255..4971
/label=EGFP
/note="enhanced GFP"
CDS 4978..5694
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
CDS 5701..6420
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
terminator 6434..6682
/label=NOS terminator
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
misc_feature 6704..6728
/label=RB T-DNA repeat
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"