我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pRK415
- 载体抗性:
- Tetracycline
- 载体长度:
- 10690 bp
- 载体类型:
- Broad host range expression vector
- 复制子:
- oriV
- 载体来源:
- Hulter N, Wackernagel W.
- 启动子:
- lac
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
pRK415 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pRK415 载体序列
LOCUS 40924_37123 10690 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION Broad host range expression vector pRK415, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 10690)
AUTHORS Hulter N, Wackernagel W.
TITLE Double illegitimate recombination events integrate DNA segments
through two different mechanisms during natural transformation of
Acinetobacter baylyi
JOURNAL Mol. Microbiol. 67 (5), 984-995 (2008)
PUBMED 18194157
REFERENCE 2 (bases 1 to 10690)
AUTHORS Huelter N, Wackernagel W.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (13-FEB-2007) Genetics, Department of Biology and
Environmental Sciences, Carl von Ossietzky University Oldenburg,
Carl-von-Ossietzkystrasse 9-11, Oldenburg 26111, Germany
REFERENCE 3 (bases 1 to 10690)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 10690)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Mol.
Microbiol."; date: "2008"; volume: "67"; issue: "5"; pages:
"984-995"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(13-FEB-2007) Genetics, Department of Biology and Environmental
Sciences, Carl von Ossietzky University Oldenburg,
Carl-von-Ossietzkystrasse 9-11, Oldenburg 26111, Germany"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..10690
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
rep_origin complement(71..602)
/direction=LEFT
/label=oriV
/note="incP origin of replication"
misc_feature 1239..1295
/label=MCS
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
promoter complement(1356..1386)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind complement(1401..1422)
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
CDS complement(1657..2025)
/codon_start=1
/label=traJ
/note="oriT-recognizing protein"
/translation="MADETKPTRKGSPPIKVYCLPDERRAIEEKAAAAGMSLSAYLLAV
GQGYKITGVVDYEHVRELARINGDLGRLGGLLKLWLTDDPRTARFGDATILALLAKIEE
KQDELGKVMMGVVRPRAEP"
oriT complement(2058..2167)
/direction=LEFT
/label=oriT
/note="incP origin of transfer"
CDS complement(2851..3498)
/codon_start=1
/label=TetR
/note="tetracycline resistance regulatory protein"
/translation="MTKLQPNTVIRAALDLLNEVGVDGLTTRKLAERLGVQQPALYWHF
RNKRALLDALAEAMLAENHTHSVPRADDDWRSFLIGNARSFRQALLAYRDGARIHAGTR
PGAPQMETADAQLRFLCEAGFSAGDAVNALMTISYFTVGAVLEEQAGDSDAGERGGTVE
QAPLSPLLRAAIDAFDEAGPDAAFEQGLAVIVDGLAKRRLVVRNVEGPRKGDD"
CDS 3604..4800
/codon_start=1
/label=TcR
/note="tetracycline efflux protein"
/translation="MKPNIPLIVILSTVALDAVGIGLIMPVLPGLLRDLVHSNDVTAHY
GILLALYALVQFACAPVLGALSDRFGRRPILLVSLAGATVDYAIMATAPFLWVLYIGRI
VAGITGATGAVAGAYIADITDGDERARHFGFMSACFGFGMVAGPVLGGLMGGFSPHAPF
FAAAALNGLNFLTGCFLLPESHKGERRPLRREALNPLASFRWARGMTVVAALMAVFFIM
QLVGQVPAALWVIFGEDRFHWDATTIGISLAAFGILHSLAQAMITGPVAARLGERRALM
LGMIADGTGYILLAFATRGWMAFPIMVLLASGGIGMPALQAMLSRQVDEERQGQLQGSL
AALTSLTSIVGPLLFTAIYAASITTWNGWAWIAGAALYLLCLPALRRGLWSGAGQRADR
"
CDS complement(6077..7222)
/codon_start=1
/label=trfA
/note="trans-acting replication protein that binds to and
activates oriV"
/translation="MNRTFDRKAYRQELIDAGFSAEDAETIASRTVMRAPRETFQSVGS
MVQQATAKIERDSVQLAPPALPAPSAAVERSRRLEQEAAGLAKSMTIDTRGTMTTKKRK
TAGEDLAKQVSEAKQAALLKHTKQQIKEMQLSLFDIAPWPDTMRAMPNDTARSALFTTR
NKKIPREALQNKVIFHVNKDVKITYTGVELRADDDELVWQQVLEYAKRTPIGEPITFTF
YELCQDLGWSINGRYYTKAEECLSRLQATAMGFTSDRVGHLESVSLLHRFRVLDRGKKT
SRCQVLIDEEIVVLFAGDHYTKFIWEKYRKLSPTARRMFDYFSSHREPYPLKLETFRLM
CGSDSTRVKKWREQVGEACEELRGSGLVEHAWVNDDLVHCKR"
rep_origin complement(join(10071..10690,1..2))
/direction=LEFT
/label=oriV
/note="incP origin of replication"