pSEAPBhBCTNf3 载体 (V003390)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pSEAPBhBCTNf3
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
11420 bp
载体类型:
Mammalian expression vector
复制子:
ori
载体来源:
De Schamphelaire W, Olbrechts A, Meert J, Verhelst K, Roggeman Fonseca M, Vanhoucke M, Beyaert R.

pSEAPBhBCTNf3 载体图谱

pSEAPBhBCTNf311420 bp5001000150020002500300035004000450050005500600065007000750080008500900095001000010500110005' flanking region of human BCTNhuman BCTN promoter region5' UTR of human BCTNSEAPunnamed protein product; part of SV40 small t-antigensmall t intronSV40 NLSSV40 poly(A) signaloriAmpRAmpR promoterf1 oriSV40 poly(A) signal

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pSEAPBhBCTNf3 载体序列

LOCUS       40924_39098       11420 bp DNA     circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION  Mammalian expression vector pSEAPBhBCTNf3, complete sequence.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 11420)
  AUTHORS   De Schamphelaire W, Olbrechts A, Meert J, Verhelst K, Roggeman 
            Fonseca M, Vanhoucke M, Beyaert R.
  TITLE     BCCM/LMBP Plasmid collection
  JOURNAL   Unpublished
REFERENCE   2  (bases 1 to 11420)
  AUTHORS   De Schamphelaire W.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (02-FEB-2017) BCCM/LMBP, Universiteit Gent, 
            Technologiepark 927, 9052, BELGIUM
REFERENCE   3  (bases 1 to 11420)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 11420)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: 
            "Unpublished"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (02-FEB-2017) BCCM/LMBP, Universiteit Gent, Technologiepark 927, 
            9052, BELGIUM"
COMMENT     SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..11420
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     misc_feature    52..3504
                     /label=5' flanking region of human BCTN
                     /note="5' flanking region of human BCTN"
     regulatory      3505..4499
                     /label=human BCTN promoter region
                     /note="human BCTN promoter region"
                     /regulatory_class="promoter"
     misc_feature    4500..4665
                     /label=5' UTR of human BCTN
                     /note="5' UTR of human BCTN"
     misc_feature    4666..5668
                     /label=part of intron 1 of human BCTN
                     /note="part of intron 1 of human BCTN"
     CDS             5667..7181
                     /label=SEAP
                     /note="secreted alkaline phosphatase from human placenta"
     CDS             7715..7789
                     /codon_start=1
                     /note="unnamed protein product; part of SV40 small
                     t-antigen"
                     /protein_id="SJL88318.1"
                     /translation="DLCEGTLLLWCDIIGQTTYRDLKL"
     intron          7791..7856
                     /label=small t intron
                     /note="SV40 (simian virus 40) small t antigen intron"
     CDS             7986..8006
                     /label=SV40 NLS
                     /note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
                     40) large T antigen"
     polyA_signal    8431..8565
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(8878..9466)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(9640..10497)
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(10498..10602)
                     /label=AmpR promoter
     rep_origin      10629..11084
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     polyA_signal    11274..11395
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"