基本信息
- 载体名称:
- pSIL2
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4507 bp
- 载体类型:
- Bacterial expression vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- De Schamphelaire W, Olbrechts A, Meert J, Verhelst K, Roggeman Fonseca M, Vanhoucke M, Beyaert R.
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，供学术研究使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pSIL2 质粒 (编号: V003189)序列
LOCUS 40924_40347 4507 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION Bacterial expression vector pSIL2, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4507)
AUTHORS De Schamphelaire W, Olbrechts A, Meert J, Verhelst K, Roggeman
Fonseca M, Vanhoucke M, Beyaert R.
TITLE BCCM/LMBP Plasmid collection
JOURNAL Unpublished
REFERENCE 2 (bases 1 to 4507)
AUTHORS De Schamphelaire W.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (02-FEB-2017) BCCM/LMBP, Universiteit Gent,
Technologiepark 927, 9052, BELGIUM
REFERENCE 3 (bases 1 to 4507)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 4507)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName:
"Unpublished"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(02-FEB-2017) BCCM/LMBP, Universiteit Gent, Technologiepark 927,
9052, BELGIUM"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4507
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
terminator 27..75
/label=fd terminator
/note="central terminator from bacteriophage fd (Otsuka and
Kunisawa, 1982)"
regulatory 134..215
/label=fd terminator
/note="fd terminator"
/regulatory_class="terminator"
terminator 137..185
/label=fd terminator
/note="central terminator from bacteriophage fd (Otsuka and
Kunisawa, 1982)"
rep_origin 313..768
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
rep_origin complement(927..1515)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature complement(1984..2362)
/label=ISS
/note="immunostimulatory sequence from the AmpR gene;
contains unmethylated CpG dinucleotides in the context of
5'-AACGTT-3' (Sato et al., 1996)"
CDS complement(2864..3520)
/label=CmR
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
promoter complement(3521..3623)
/label=cat promoter
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
promoter 3788..3816
/label=tac promoter
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
protein_bind 3824..3840
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
misc_feature 3865..3881
/label=5' UTR of ompA, incl. RBS
/note="5' UTR of ompA, incl. RBS"
sig_peptide 3882..3944
/label=OmpA signal peptide
/note="signal peptide from the E. coli outer membrane
protein OmpA"
CDS 3948..4397
/codon_start=1
/note="unnamed protein product; mIL2 mature sequence"
/protein_id="SJL88730.1"
/translation="APTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQHLEQLLMDLQELLSRMENY
RNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDELGPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNI
RVTVVKLKGSDNTFECQFDDESATVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQ"
misc_feature 4398..4500
/label=3' UTR of mIL2
/note="3' UTR of mIL2"