pCKD100 载体图谱和序列

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:: pCKD100

载体抗性:: Chloramphenicol

载体长度:: 6205 bp

载体类型:: Suicide vector

复制子:: R6K γ ori

载体来源:: Nazareno ES, Acharya B, Dumenyo CK.

pCKD100 载体载体图谱

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pCKD100 载体载体序列

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LOCUS       62056_6495        6205 bp DNA     circular SYN 03-NOV-2020
DEFINITION  Suicide vector pCKD100, complete sequence.
ACCESSION   MW039600
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6205)
  AUTHORS   Nazareno ES, Acharya B, Dumenyo CK.
  TITLE     A mini-Tn5-derived transposon with reportable and selectable markers
            enables rapid generation and screening of insertional mutants in 
            Gram-negative bacteria
  JOURNAL   Lett. Appl. Microbiol. (2020) In press
REFERENCE   2  (bases 1 to 6205)
  AUTHORS   Nazareno ES, Acharya B, Dumenyo CK.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   
REFERENCE   3  (bases 1 to 6205)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Lett. Appl.
            Microbiol. (2020) In press"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (25-SEP-2020) Agricultural "
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6205
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     repeat_region   7..25
                     /label=Tn5 inverted repeat
                     /note="Tn5 inverted repeat"
     misc_feature    26..59
                     /label=rare-cutting endonuclease multiple cloning site I
                     /note="rare-cutting endonuclease multiple cloning site I"
     rep_origin      complement(84..472)
                     /direction=LEFT
                     /label=R6K gamma ori
                     /note="gamma replication origin from E. coli plasmid R6K;
                     requires the R6K initiator protein pi for replication"
     CDS             complement(610..1266)
                     /label=CmR
                     /note="chloramphenicol acetyltransferase"
     misc_feature    1341..1360
                     /label=rare-cutting endonuclease multiple cloning site II
                     /note="rare-cutting endonuclease multiple cloning site II"
     CDS             complement(1537..2328)
                     /label=NeoR/KanR
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase"
     CDS             complement(2396..3109)
                     /label=GFPuv
                     /note="GFP variant optimized for excitation by UV light"
     gene            complement(3114..3165)
                     /gene="atpE"
                     /label=atpE
     regulatory      complement(3114..3165)
                     /gene="atpE"
                     /regulatory_class="ribosome_binding_site"
     repeat_region   3181..3198
                     /rpt_family="Tn5"
     oriT            3915..4024
                     /label=oriT
                     /note="incP origin of transfer"
     CDS             complement(4686..6113)
                     /label=Tn5 transposase
                     /note="transposase from the bacterial Tn5 transposon
                     (Reznikoff, 1993)"

pCKD100 载体 (V016274)

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