低温电子显微镜(cryo-EM)本质上是一种电子显微镜(EM)技术。突破性的将含水生物样品快速冷冻并用电子束照射。检测器检测电子的散射方式,最后利用三维重构的技术得到目标的结构数据。
本页面介绍的是冷冻电镜结构生物学服务,如需了解基于X-ray的晶体结构生物学服务请访问:
尽管该技术的发展始于1970年代,但之前一直受制于分辨率的限制。最新的检测器技术和软件算法的最新进展已允许以接近原子的分辨率确定生物分子结构。在未来,冷冻电镜有希望替代X射线晶体学或NMR光谱法来确定大分子结构,而无需再进行结晶。 2017年,诺贝尔化学奖授予了雅克•杜博谢特(Jacques Dubochet),约阿希姆•弗兰克(Joachim Frank)和理查德•亨德森(Richard Henderson),“他们开发了用于分辨溶液中生物分子的高分辨率结构的冷冻电子显微镜。” 2016年Nature Methods也被称为cryo-EM。被评为 “年度最佳方法”。
服务总览
纽普可提供一站式结构生物学服务,您仅需提供您需要表达的基因序列/cDNA模板,我们帮您从基因设计开始、优化基因、基因合成、亚克隆、再进行蛋白表达及可溶性测试、冷冻制样,数据收集,结构解析,到最后提交数据到PDB,并协助文论撰写。
服务价格 | 分步报价 |
---|---|
项目周期 | 1-2个月 |
服务项目 |
备注说明 |
报价 |
时间 |
第一步,负染检测 |
制一个样需要3ul左右的蛋白,共需要20ul左右的蛋白(50-100ug)。冷冻制样需要优化的参数很多,包括样品浓度的优化,blot time的优化,温度的优化,grid规格(铜网或者金网)的优化等一系列条件的优化 |
4800元 |
一周 |
第二步, 制样+初步数据收集 |
这一步是为了测试一下样品质量,评估分辨率能不能做到比较好的水平。数据收集:200千伏3个小时;300千伏10个小时 |
2.6万元(含材料费) |
2天 |
第三步,完整数据收集36-48小时 |
2000元/小时,我们可以提供10T硬盘寄过去,或者现场拷贝数据。 |
7.2万-9.6万 |
一周 |
第四步,结构解析 |
客户方来解结构或者由我方来解结构(需要根据数据质量评估报价)。 |
询价 |
- |
项目为分步收费,原料可以自行购买或者制备。
需要提前预付第一,二步的费用。完成后提交数据报告。如果数据符合要求,进行第三步。如果数据前两步数据客户觉得不符合要求,则不再进行第三步。
实验流程
1. 蛋白样品制备,分子筛和SDS-PAGE检测
实验目的:确定蛋白样品的纯度>95%
2. 负染检测
实验目的:确定蛋白样品的均一性;
A) Horse spleen ferritin, B) fragment of antigen binding Fab, C) archaeal 20S proteasome and D) nucleosome. All images were recorded with the same magnification. The scale bar is 20nm.
仪器: Talos L120C 透射电子显微镜(TEM)
3. 冷冻电镜数据收集(小试);
200kV冷冻透射电子显微镜数据收集3小时;
300kV冷冻透射电子显微镜数据收集5-10小时。
实验目的:确定冷冻电镜样品质量,得到初步的低分辨率结构模型。
cryo-EM micrograph collected with a Gatan K2 Summit camera on a FEI Titan Krios microscope operated at 300 kV with Volta Phase Plate. The length of the scale bar is 20 nm.
仪器: FEI 300kV Titan Krios透射电子显微镜(TEM)
4. 冷冻电镜数据收集(完整)
300kV冷冻透射电子显微镜数据收集48-72小时。
实验目的:收集完整的冷冻电镜数据用于后续的结构重构。方法与第三步类似。
5. 数据处理,3D结构搭建。
实验目的:通过漂移矫正后进行2D成像和图像筛选,再搭建3D结构模型,最后经过进一步优化得到目的蛋白三维结构。
服务流程
如何开始?
1. 下载并填写蛋白结构解析需求表,发送到指定邮箱
2. 我们会根据您提供的信息尽快评估可行性并给出报价
3. 签订合同
4. 项目起始
5. 项目交付
6. 支付项目服务费