我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Bacterial expression of WT L. buccalis C2c2 CRISPR effector. Codon optimized for E. Coli expression. His-MBP fusion tag can be removed with TEV protease.
- 载体名称:
- p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_WT
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 9437 bp
- 载体类型:
- CRISPR Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Jennifer Doudna
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- tet
- 克隆方法:
- Enzyme Cut
- 5'引物:
- T7 promoter
- 3'引物:
- T7 terminator
- 载体标签:
- MBP
- 表达方法:
- IPTG induced
p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_WT 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_WT 载体序列
LOCUS V010157 9437 bp DNA circular SYN 03-JUL-2018
DEFINITION Exported.
ACCESSION V010157
VERSION V010157
KEYWORDS p2CT-His-MBP-Lbu-C2c2-WT
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 9437)
AUTHORS East-Seletsky A, O'Connell MR, Knight SC, Burstein D, Cate JH, Tjian
R, Doudna JA
TITLE Two distinct RNase activities of CRISPR-C2c2 enable guide-RNA
processing and RNA detection.
JOURNAL Nature. 2016 Sep 26. doi: 10.1038/nature19802.
PUBMED 27669025
REFERENCE 2 (bases 1 to 9437)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 9437)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nature.
2016 Sep 26. doi: 10.1038/nature19802."
SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..9437
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 104..208
/label="AmpR promoter"
CDS 209..1066
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
rep_origin 1240..1828
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature complement(2014..2156)
/label="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(2261..2449)
/label="rop"
/note="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
promoter 4010..4028
/label="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
RBS 4117..4139
/label="RBS"
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
CDS 4159..4176
/label="6xHis"
/note="6xHis affinity tag"
CDS 4186..5286
/label="MBP"
/note="maltose binding protein from E. coli"
CDS 5341..5361
/label="TEV site"
/note="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
cleavage site"
CDS 5368..8844
/gene="cas13a"
/label="CRISPR-associated endoribonuclease Cas13a"
/note="CRISPR-associated endoribonuclease Cas13a from
Leptotrichia buccalis (strain ATCC 14201 / DSM 1135 / JCM
12969 / NCTC 10249 / C-1013-b). Accession#: C7NBY4"
terminator 8987..9034
/label="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
promoter complement(9400..9428)
/label="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"